胆囊结石患者华支睾吸虫感染与胆囊结石关系的初步研究

摘要

胆囊结石在全球范围内都是常见病，流行病学研究发现人群发病率约为10％[1];随着人们生活水平不断提高、饮食结构发生改变、人口老龄化的发展，胆囊结石发病率呈上升趋势[2-6]。为了探明胆囊结石的病因及发病机制，许多学者做了大量的相关研究，但至今仍未明确[7-12]。国内外学者对华支睾吸虫感染与胆结石的关系做了研究，提出华支睾吸虫感染与胆管结石相关，但与胆囊结石无关[13-20]。而我们在对胆囊结石进行显微镜镜检时发现了华支睾吸虫卵[21]，并进行了深入研究。
　　 目的:探讨胆囊结石患者华支睾吸虫感染与胆囊结石的关系。
　　 方法:(1)傅里叶红外光谱分析结石的物质成分，所得胆囊结石的红外光谱与标准样品的红外光谱进行比较，根据光谱特征峰分析并确定结石类型[22,23]。(2)结石研碎加生理盐水涂片，每份标本涂片2～3张，光学显微镜下观察。(3)荧光定量PCR检测结石中华支睾吸虫DNA。(4)经干燥后的结石采用离子溅射仪镀膜，扫描电镜观察，同时对感兴趣区行X-射线能谱分析。
　　 结果:(1)胆囊结石主要成分为胆红素及其盐、胆固醇、碳酸钙、硬脂酸钙等，根据主要成分的不同分为胆固醇型结石、色素型结石和混合型结石。(2)结石研碎镜检法在胆囊结石中发现虫卵，从形态学上初步判断为华支睾吸虫卵，荧光PCR结果从基因学的角度证实上述虫卵为华支睾吸虫卵。(3)华支睾吸虫卵阳性结石主要是胆色素型结石。华支睾吸虫病流行区以胆色素型结石为主，非流行区以胆固醇型结石为主。(4)扫描电镜和X-射线能谱分析结果显示，各种类型的结石微观结构和元素成分差异较大且各具特点，华支睾吸虫卵阳性结石的元素成分尤为复杂。
　　 结论:本研究通过结石研碎镜检在胆囊结石中发现了华支睾吸虫卵，结合红外光谱分析揭示华支睾吸虫卵阳性结石主要是胆色素型结石，表明华支睾吸虫感染与胆囊结石尤其是胆色素型结石的形成有关。各种类型的结石微观结构和元素成分差异较大且各具特点，华支睾吸虫卵阳性结石的元素成分尤为复杂。

目录

声明

摘要

前言

第一章 材料与方法

1．1 标本来源

1．2 主要试剂和材料

1．3 主要仪器

1．4 胆囊结石的获取和处理

1．4．1 胆囊结石的获取

1．4．2 胆囊结石的处理

1．5 傅立叶红外光谱分析结石的物质成分

1．6 结石光镜镜检

1．7 荧光定量PCR检测胆囊结石中华支睾吸虫DNA

1．7．1 DNA的提取

1．7．2 引物设计与合成

1．7．3 实时荧光PCR反应条件及体系的建立

1．8 结石的扫描电镜观察及X射线能谱分析

1．9 统计分析

第二章 结果

第三章 讨论

第四章 附图和附表

第五章 总结

参考文献

综述

名词缩略表

致谢

附录