冠心Ⅱ号心脏保护作用的物质基础及其舒张大鼠胸主动脉机制的研究

摘要

背景:方剂是中医临床治疗疾病的主要工具与手段，其临床疗效经过几千年的实践已毋庸置疑。但是是什么活性成分产生了方剂疗效作用，机制是什么，该问题一直是长期存在的重大问题，也是制约中医药现代化的瓶颈。本课题拟采用BAP策略研究冠心Ⅱ的心脏保护作用的物质基础和其舒张大鼠胸主动脉环的机制，从而解决这长期困扰中医药学术界的难题。
　　 1、冠心Ⅱ心脏保护作用的物质基础研究回顾
　　 目的:回顾冠心Ⅱ号和其吸收活性物质FTAPE单独和联合应用对大鼠的心脏保护作用。方法:利用我课题组资料，采用结扎左冠状动脉前降支法建立大鼠急性心肌梗死模型。用HPLC测得冠心Ⅱ号的五种主要成分含量(mg/g)如下:丹参素:0.936±0.013;阿魏酸:0.169±0.004;羟基红花黄色素A:2.591±0.021;原儿茶醛0.018±0.001(P);芍药苷3.715±0.123(E)。FTAPE单独和联合应用和母方疗效比较。结果:将FTA混合物与母方疗效比较，FAT剂量等于母方中含量两者心脏保护作用疗效类似。结论:冠心Ⅱ号的心脏保护作用是由吸收的FTA三成分引起的。
　　 2、丹参素舒张大鼠胸主动脉机制研究
　　 目的:明确丹参素对大鼠离体血管环张力的影响，探讨其具体机制。
　　 方法:采用大鼠离体胸主动脉灌流技术，以累积浓度法观测丹参素（10-1M～10-6M）对基础状态、苯丙肾上腺素(1μmol/L)和氯化钾KCl(60mmol/L)预收缩的血管环张力的影响;运用一氧化氮合酶抑制剂N-硝基-L-精氨酸甲酯(10μmol/L)、鸟苷酸环化酶抑制剂亚甲蓝（10μmol/L）、环氧合酶抑制剂吲哚美辛（10μmol/L）处理血管环，探讨影响血管环张力的机制。结果:对基础状态或氯化钾(60mmol/L)预收缩的血管环无影响，而对苯丙肾上腺素(1μmol/L)预收缩的内皮完整血管环产生浓度依赖性的舒张作用，并且去除内皮后的舒张作用被取消。用N-硝基-L-精氨酸甲酯（10μmol/L）和亚甲蓝（10μmol/L）预处理后，均可阻断的舒张血管作用，而用吲哚美辛（10μmol/L）预处理后未能阻断的血管舒张作用。结论:丹参素(T)(10-1M～10-6M)通过NO-sGC-cGMP途径产生内皮依赖的血管舒张作用。
　　 3、阿魏酸舒张大鼠胸主动脉机制研究
　　 目的:明确阿魏酸对大鼠离体血管环张力的影响，探讨其具体机制。
　　 方法:采用大鼠离体胸主动脉灌流技术，以累积浓度法观测阿魏酸(10-1mM～103mM)对基础状态、苯丙肾上腺素(1μmol/L)和氯化钾（60mmol/L）预收缩的血管环张力的影响;在无钙K-H液中，以累积浓度法观测阿魏酸(10-1mM～103mM)对苯丙肾上腺素和咖啡因预收缩的血管环张力的影响;分别运用钾通道阻断剂四乙胺(10mmol/L)、格列本脲(10μmol/L)、氯化钡(1 mmol/L)、4-氨基吡啶(1mmol/L)处理血管环，探讨影响血管环张力的机制。结果:对基础状态或氯化钾(60mmol/L)预收缩的血管环无影响，而对苯丙肾上腺素（1μmol/L）预收缩的内皮完整和去内皮的血管环产生浓度依赖性的舒张作用，并且去除内皮后的舒张作用未受影响。在无钙K-H液中，可舒张咖啡因(20mol/L)预收缩的血管环。格列本脲可部分阻断阿魏酸（10-1mM～103mM）舒张血管环的作用。结论:我们最终认为阿魏酸(F)(10-1mM～103mM)舒张血管环的机制是非内皮依赖性的，是通过阻滞ROC进一步抑制细胞内肌浆网中ryanodine或咖啡因敏感钙池的Ca2+释放和一定程度上是通过开放ATP敏感性钾通道(ATP-Sensitive potassium channel，KATP)而实现的。
　　 4、羟基红花黄色素A舒张大鼠胸主动脉机制研究
　　 目的:明确羟基红花黄色素A对大鼠离体血管环张力的影响，探讨其具体机制。方法:采用大鼠离体胸主动脉灌流技术，以累积浓度法观测羟基红花黄色素A(10-1M～10-6M)对基础状态、苯丙肾上腺素（1μmol/L）和氯化钾(60mmol/L)预收缩的血管环张力的影响;运用一氧化氮合酶抑制剂N-硝基-L-精氨酸甲酯环氧合酶抑制剂环氧合酶抑制剂吲哚美辛处理血管环;在无钙K-H液中，以累积浓度法观测阿魏酸对苯丙肾上腺素（1μmol/L）和咖啡因(20mol/L)预收缩的血管环张力的影响;另外分别运用钾通道阻断剂四乙胺(10mmol/L)、格列本脲（10μmol/L）、氯化钡(1mmol/L)、4-氨基吡啶(1mmol/L)处理血管环，探讨影响血管环张力的机制。结果:对基础状态预收缩的血管环无影响，而对氯化钾和苯丙肾上腺素预收缩的内皮完整血管环产生浓度依赖性的舒张作用，并且去除内皮后的舒张作用被部分抑制。用左吲哚美辛（10μmol/L）预处理后，可部分阻断的舒张血管作用，而用N-硝基-L-精氨酸甲酯(10μmol/L)预处理后未能阻断的血管舒张作用。在无钙K-H液中，可舒张苯丙肾上腺预收缩的血管环。4-氨基吡啶(1mmol/L)可部分阻断阿魏酸舒张血管环的作用。结论:综上所述，我们最终认为羟基红花黄色素A(A)(10-1M～10-6M)舒张血管环的机制是内皮依赖性和非内皮依赖性两种机制共同作用的结果。其中内皮依赖性舒张机制是通过前列腺素类物质的产生与特异性受体结合后发挥扩张血管的作用;非内皮依赖性是通过通过阻滞ROC和VOC进一步抑制细胞内IP3敏感Ca2+通道的开放和一定程度上是通过开放电压依赖型钾通道(voltage dependent potassium channel，KV)而实现的。
　　 总结:冠心Ⅱ号有多靶点的心脏保护作用，我们证明FTA是心脏保护的药效学物质基础;FTA做为冠心Ⅱ号体内通过扩张血管增加MBF的药效学基础，三者的机制联合应该做为冠心Ⅱ号舒张血管增加MBF的综合机制，即:内皮依赖性通过增加内皮产生NO(NO-sGC-cGMP途径)和前列腺素类物质舒张血管;非内皮依赖性是通过阻断VOC和ROC减少细胞外Ca2+内流、抑制细胞内ryanodine或咖啡因敏感钙池的Ca2+和IP3敏感Ca2+通道的开放和开放KATP，Kv等机制的联合作用。

目录

声明

摘要

符号说明

第一章 前言

1 前期课题工作基础

1．1 课题研究背景

1．2 冠心Ⅱ课题研究基础

2 冠心Ⅱ心脏保护作用的物质基础研究

2．1 冠心Ⅱ号汤剂制备

2．2 心梗模型制作

2．3 冠心Ⅱ急性灌胃剂量确定

2．4 实验研究

2．5 24小时心肌梗死面积的测定

2．6 荧光微球技术测定MBF参考文献进行

3 结果

3．1 冠心Ⅱ及其ABCs组分配伍对大鼠心肌梗死范围的影响

3．2 冠心Ⅱ和FTA(急性灌胃)对心梗大鼠MBF的影响

4 讨论

4．1 建立方剂急性药效研究方法，更新了中药以慢性调整药效为主的观念

4．2 BAP策略阐明冠心Ⅱ疗效的心脏保护的物质基础

4．3 阐明FTA增加MBF与母方一致，是心脏保护机制之一

4．4 冠心Ⅱ号心脏保护机制的进一步研究

5 小结

6 选题意义与研究思路

6．1 选题意义

6．2 研究思路

第二章 丹参素舒张大鼠胸主动脉机制研究

1 前言

2 材料

2．1 实验器材

2．2 实验设备

2．3 实验动物

2．4 药物

2．5 试剂

2．6 混合标准气体(Standardgases)

3 方法

3．1 药物的准备

3．2 台式液的准备

3．3 血管环的制备及平衡

3．4 去内皮血管环的制备

3．5 实验分组设计

3．6 统计方法

4 结果

4．1 丹参素(T)对离体血管环张力的作用

4．2 丹参素(T)影响内皮完整血管环张力的作用机制

5 讨论

6 小结

第三章 阿魏酸舒张大鼠胸主动脉机制研究

1 前言

2 材料

2．1 实验器材

2．2 实验设备

2．3 实验动物

2．4 药物

2．5 试剂

2．6 混合标准气体(Standardgases)

3 方法

3．1 药物的准备

3．2 台式液的准备

3．3 血管环的制备及平衡

3．4 去内皮血管环的制备

3．5 实验分组设计

3．6 统计方法

4 结果

4．1 阿魏酸(F)对离体血管环张力的作用

4．2 阿魏酸(F)舒张血管环张力的作用机制

5．讨论

6 小结

第四章 羟基红花黄色素A舒张大鼠胸主动脉机制研究

1 前言

2 材料

2．1 实验器材

2．2 实验设备

2．3 实验动物

2．4 药物

2．5 试剂

2．6 混合标准气体(Standardgases)

3 方法

3．1 药物的准备

3．2 台式液的准备

3．3 血管环的制备及平衡

3．4 去内皮血管环的制备

3．5 实验分组设计

3．6 统计方法

4 结果

4．1 羟基红花黄色素A(A)对离体血管环张力的作用

4．2 羟基红花黄色素A(A)内皮依赖性的作用机制研究

4．3 羟基红花黄色素A(A)非内皮依赖性的作用机制研究

5．讨论

6 小结

第五章 结论

参考文献

综述

致谢

攻读博士学位期间主要的研究成果