子宫内膜异位症组蛋白修饰异常及血清microRNA表达异常的研究

摘要

本文对子宫内膜异位症组蛋白修饰异常及血清microRNA表达异常进行了研究。本研究分为两个部分：
　　第一部分：子宫内膜异位症组蛋白修饰异常的研究。
　　目的：研究子宫内膜异位症(endometriosis，EMs)患者异位内膜及在位内膜组蛋白乙酰化和甲基化状态，组蛋白乙酰化酶（HATs），组蛋白去乙酰化酶(HDACs)及组蛋白甲基转移酶（HMTs）在异位内膜及在位内膜中的表达及其与基因组乙酰化和甲基化水平之间的相互关系。
　　方法：利用EpiQuikTM（H3 K4/H3 K9甲基化及H3/H4乙酰化）试剂盒对15例EMs患者异位内膜、在位内膜及11例正常对照组内膜进行组蛋白抽提和H3/H4乙酰化，H3K4/H3K9甲基化检测，同时通过Real-time PCR检测HATs(P300，CREBBP矛口PCAF)，HDACs(HDAC1, HDAC2, HDAC4, HDAC5, HDAC7和SIRT1)及HMTs（SUV39H1，SUV39H2和G9a）的mRNA的表达水平。
　　结果：EMs患者在位内膜及异位内膜组蛋白H4整体乙酰化水平明显低于正常对照组(p=0.005)，而组蛋白H3整体乙酰化水平三组之间无明显统计学差异(p＞0.05)。在位内膜及异位内膜组蛋白H3K4甲基化总水平明显低于正常对照组(p＜0.001)，异位内膜H3K9甲基化水平明显低于在位内膜组及正常对照组(p＜0.001)，另两组间无明显统计学差异(p＞0.05)。在HATs中，三组之间p300表达水平均无明显统计学差异(p＞0.05)，CREBBP在位内膜组表达明显高于异位内膜组(p=0.001)，PCAF异位内膜组高于正常对照组及在位内膜组(p=0.047，p=0.005)，而另两组间无明显统计学差异(p＞0.05)。在HDACs中，HDAC4、HDAC5、HDAC7表达水平三个组之间无明显统计学差异(p＞0.05)，HDAC1异位内膜组表达水平明显低于正常对照组(p=0.006)，在位内膜组与其余两组间均无明显统计学差异(p＞0.05)，HDAC2在位内膜组表达均明显高于正常对照组及异位内膜组(p＜0.001，p＜0.001)，另两组间无统计学意义，SIRT1在位内膜组表达低于正常对照组及异位内膜组(p=0.037，p=0.039)，另两组之间无明显统计学差异(p＞0.05)。在HMTs中，SUV39H1异位内膜组表达明显低于正常对照组(p=0.006)，其余各组间无明显统计学意义，SUV39H2异位内膜组表达水平明显低于正常对照组及在位内膜组(p=0.002，p=0.012)，且另两组间表达水平无统计学差异(p＞0.05)，G9a异位内膜组表达均低于正常对照组(p＜0.001)，余各组间无明显统计学差异(p＞0.05)。
　　结论：EMs患者在位和异位内膜组织组蛋白呈低乙酰化和低甲基化状态，组蛋白乙酰化酶，去乙酰化酶和甲基化酶表达异常，提示其可能参与EMs的发病。
　　第二部分：子宫内膜异位症患者血清microRNA表达的变化。
　　目的：研究子宫内膜异位症患者血清中microRNA(miRNA)表达的变化。
　　方法：分离9例子宫内膜异位症患者和9例正常对照者血清，用Trizol试剂提取总RNA及miRNA，应用高通量miRNA测序方法检测血清中异常表达的miRNA，并应用Real-time PCR法对30例子宫内膜异位症患者和20例正常对照者血清扩大样本进行初步验证。
　　结果：和正常对照组相比较，EMs组中98个miRNAs表达显著下调，10个miRNAs表达显著上调。挑选EMs组中表达下调的3个miRNAs分子hsa-miR-99b-5p、hsa-miR-127-3p、hsa-miR-30c-5p和表达上调的2个miRNAs分子hsa-miR-424-3p和hsa-miR-185-5p，通过Real-time PCR法进行验证。结果显示:与正常对照组相比较，hsa-miR-99b-5p、hsa-miR-127-3p、hsa-miR-30c-5p表达水平均显著下调，而hsa-miR-424-3p和hsa-miR-185-5p表达均显著上调(p＜0.05)。
　　结论：子宫内膜异位症患者血清中miRNA表达异常。

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声明

论文说明

摘要

缩略词表

前言

第一部分 子宫内膜异位症组蛋白修饰异常的研究

第一章 研究背景

第二章 材料与方法

2．1 研究对象

2．2 仪器设备与试剂

2．3 实验方法

2．4 统计分析

第三章 结果

3．1 组蛋白乙酰化及甲基化测定

3．2 实时-定量PCR测定

3．3 组蛋白调节基因表达测定

3．4 组蛋白H4乙酰化及H3K4、H3K9甲基化与EMs分期相关性比较

3．5 组蛋白调节基因与EMs分期相关性比较

3．6 组蛋白乙酰化酶、去乙酰化酶mRNA表达与H4乙酰化水平相关性比较

3．7 组蛋白甲基化转移酶mRNA表达与H3K9甲基化水平相关性比较

第四章 讨论

第五章 结论

第二部分 子宫内膜异位症患者血清microRNA表达的变化

第一章 研究背景

第二章 材料与方法

2．1 材料和方法

2．2 仪器设备与试剂

2．3 主要试剂及耗材

2．4 其他常用试剂

2．5 实验步骤

2．6 统计分析

第三章 结果

3．1 solexa测序结果

第四章 讨论

4．1 miRNA与子宫内膜异位症

4．2 血清miRNA作为新型疾病标志物的应用前景

第五章 结论

参考文献

综述一 组蛋白修饰与子宫内膜异位症的研究进展

综述二 microRNA与子宫内膜异位症的研究进展

致谢

攻读博士学位期间的主要研究成果