特异性靶向晚期糖基化终产物受体(RAGE)的siRNA降低人类乳腺癌增殖研究

摘要

背景:晚期糖基化终产物受体(RAGE)在多种人类癌细胞中高水平表达;然而，它在乳腺癌发生和增殖过程中的作用尚不清楚。
　　目的:本研究探讨了RAGE对于乳腺癌的生物学行为变化的影响。
　　方法:本研究分为体外和体内研究两个部分。体外研究中，选择乳腺癌细胞系MDA-MB-231（三阴性）、SK-Br-3（HER2阳性）和MCF-7（ER阳性）作为研究对象，靶向RAGE的siRNA可降低这三种细胞系中RAGE基因的表达。实时荧光定量PCR和Western blot检测RAGE，NF-κB P65，Cyclin D1和PCNA的表达。MTT法和细胞周期分析法探讨了RAGE敲低对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响。另一方面，在体内研究中，通过将21只裸鼠随机分为六组:分别为RAGE-siRNA组、RAGE-siRNA+Doxorubicin组、Negative RNA+ Doxorubicin组、Doxorubicin组、Negative siRNA组以及空白对照组，通过游标卡尺测量、生物发光成像(BLI)和磁共振成像(MRI)监测移植至裸鼠体内的肿瘤生长情况。随后通过免疫组化(IHC)分析肿瘤样本中RAGE，PCNA，CyclinD1和NF-κB p65的表达水平。
　　结果:我们发现RAGE的表达水平与乳腺癌的严重程度相关。此外，下调RAGE表达可以使体外培养的三种乳腺癌细胞系(MDA-MB-231，SK-Br-3和MCF-7)的增殖水平下降并且可抑制移植到裸鼠体内的肿瘤生长。靶向RAGE的siRNA可将细胞阻滞在G1期并且抑制DNA的合成(P＜0.05)。此外，实时荧光定量PCR，Western blot和免疫组化结果显示，靶向RAGE的siRNA可降低核转录因子NF-κB p65、细胞增殖标记PCNA和CyclinD1的表达。
　　结论:RAGE可在三种乳腺癌亚型特别是侵袭性强的三阴性亚型乳腺癌细胞中过表达。RAGE表达下调的细胞，其增殖能力下降并且能显著性地抑制肿瘤的生长。然而，RAGE敲低并不能提高肿瘤对阿霉素的敏感性。这些结果表明，以RAGE为治疗靶点可以作为乳腺癌治疗的一种新策略。

目录

声明

摘要

Abstract

Index

简称 Abbreviation

Introduction

Chapter(1) In vitro study RAGE expression in breast cancer cell lines

1．1 Materials and Methods

1．2 Results

1．3．Conclusion

Chapter 2 The Effects of RAGE targeting siRNA on the biological behavior changes of breast cancer cell lines

2．1 Materials and Methods

2．2．Results

2．3 Conclusion

Chapter 3 In vivo study The Effects of RAGE targeting siRNA and combination with doxorubiein on the MDA-MB-231-luc breast cancer growth

3．1 Materials and Methods

3．2 Result

3．3 Conclusion

Chapter 4 Diseussion

Chapter 5 Conclusion

References

Review Receptor for Advanced Glycation End Products (RAGE)，Breast cancer and Bioluminescence imaging

攻读学位期间主要的研究成果

Acknowledgement