AG490对人视网膜母细胞瘤HXO-RB44细胞株JAK2/STAT3信号通路的影响

摘要

目的: 研究JAK激酶抑制剂AG490干预JAK2/STAT3信号通路后对人视网膜母细胞瘤HXO-RB44细胞株体外抗增殖及细胞周期的作用，并观察AG490对HXO-RB44细胞株中STAT3，p-STAT3，VEGF蛋白表达的影响。探讨JAK3/STAT3信号通路及VEGF在RB发展中的作用，评估其在药物靶向治疗RB的可能性。
　　方法: (1)培养人视网膜母细胞瘤HXO-RB44细胞株，观察活细胞生长情况。(2)实验分组及检测:本实验分为实验组和对照组，实验组又分为A、B、C、D、E、F组，HXO-RB44细胞株加入不同浓度的AG490处理，药物浓度依次为6.25μM，12.5μM，25.0μM，50μM，100μM，200μM。对照组:不加任何药物处理，仅加RPMI-1640培养液进行培养。选用处于对数生长期的HXO-RB44细胞，加入不同浓度的JAK抑制剂AG490进行干预。用下列方法进一步研究:1）采用MTS试剂盒对各组细胞进行处理并检测其增殖状态。2）应用流式细胞学技术对各组中细胞凋亡及周期进行分析。3)Western blot法检测各组中STAT3、p-STAT3及VEGF蛋白的表达。
　　结果: JAK激酶抑制剂AG490处理HXO-RB4448小时后:(1) MTS法检测显示:AG490实验组(6.25μM，12.5μM，25μM，50μM，100μM，200μM)随着药物浓度的增加，细胞抑制率增加，细胞存活率下降。六个实验组的细胞抑制率平均值依次为:7.18±8.78％，20.02±2.21％，31.92±5.30％，58.61±4.27％，62.17±6.05％，72.67±1.51％，有逐渐增高的趋势，与对照组两两相比较，6.25μM实验组差异无统计学意义(P＞0.05)，其余五组均有显著差异，有统计学意义(P＜0.05)。(2)流式细胞技术显示:根据MTS实验结果筛选5个不同浓度的实验组（6.25μM,12.5μM，25μM，50μM，100μM）的细胞,随着AG490药物浓度的增加细胞凋亡率呈逐渐增高趋势，依次为:8.94±2.21％，12.86±2.12％，13.59±1.22％，26.51±2.01％，35，37±1.95％，与对照组（凋亡率平均值:4.10±2.35％）相比，有显著差异，具有统计学意义(P＜0.05)。50μM和100μM与对照组相比，细胞出现G0/G1期阻滞现象，G1期细胞比例显著增多，相应的处于S期的细胞比例减少，差异具有统计学意义(P＜0.05)。(3) Western Blot实验显示:随着AG490药物浓度的增加，STAT3蛋白的表达量逐渐下降，其灰度值依次为:2.11±0.23，1.77±0.18，1.27±0.18，1.15±0.19，0.77±0.11，与对照组（灰度值:3.84±0.21）相比，差异有统计学意义(P＜0.05);p-STAT3表达量逐渐下降，其灰度值依次为:1.12±0.12，1.11±0.11，0.82±0.09，0.38±0.04，0.35±0.04，与对照组（灰度值:1.52±0.14）相比，差异有统计学意义(P＜0.05); VEGF表达量逐渐下降，其灰度值依次为:2.56±0.11，2.51±0.14，1.96±0.18，1.81±0.12,1.31±0.06，与对照组（灰度值:2.61±0.15）相比，6.25μM，12.5μM，实验组差异无统计学意义(P＞0.05)，其余各实验组差异有统计学意义(P＜0.05)。
　　结论: (1)JAK激酶抑制剂AG490抑制了HXO-RB44细胞株生长及增殖，呈浓度依赖性。(2)JAK激酶抑制剂AG490使凋亡细胞增多，促进了细胞的凋亡并改变了周期的分布，并呈浓度依赖性。(3)JAK激酶抑制剂AG490可通过阻断JAK2/STAT3信号通路而下调STAT3，p-STAT3，VEGF的表达，从而抑制了HXO-RB44细胞株的增殖，加速其凋亡的发生。(4)上述结果为AG490靶向治疗视网膜母细胞瘤提供了理论依据和实验基础。