低温NMDA受体拮抗剂MK-801逆行灌注对猪脊髓损伤的保护作用

摘要

目的:脊髓缺血再灌注损伤造成的截瘫是大血管手术后的灾难性并发症，其发生机制及防治方法仍存在诸多争议，本文将探讨经副半奇静脉逆行灌注低温NMDA受体拮抗剂MK-801对脊髓损伤的中长期保护作用，以期建立一种简便、安全、可靠的脊髓保护方法。
　　方法:健康成年西藏小型猪24头随机分为:A组(假手术组n=6)，B组（对照组n=6）C组（低温林格氏液逆灌组n=6）和D组（低温MK-801逆灌组n=6）。B、C、D三组通过阻断降主动脉+左锁骨下动脉70min建立脊髓缺血再灌注损伤模型，阻断期间，C、D两组分别经副半奇静脉持续逆行灌注低温林格氏液(1000ml/h)与低温MK-801溶液(1000ml/h，0.01mg/ml);连续监测鼻咽温、心率、近端动脉压、远端动脉压，每10min行躯体感觉诱发电位检测，每30min行动脉血气分析;再灌注6h、24h、30d参照Tarlov标准进行后肢运动功能评分;再灌注30d处死所有动物，取L3节段脊髓行HE染色、尼氏体染色及微管结合蛋白（MAP-2）免疫组化检测。
　　结果:成功建立脊髓缺血再灌注损伤模型，阻断期间，与A组相比，B、C、D组心率、近端平均动脉压及远端平均动脉压存在统计学差异;再灌注6h，D组Tarlov评分（3.2±0.8）明显优于B组（1.0±1.3）和C组（2.7±0.5），与A组（4.0±0.0）相比有统计学差异，再灌注24h，D组Tarlov评分（3.3±0.5）与B组（1.7±1.2）和C组(2.8±0.8)相比有显著差异，与A组（4.0±0.0）相比有统计学差异，再灌注30d，D组Tarlov评分（3.8±0.4）优于B组（2.7±0.8）和C组（3.5±0.5），与A组（4.0±0.0）相比有统计学差异;阻断期间，B、C、D三组均出现躯体感觉诱发电位(SSEPs)潜伏期延长、振幅减小，直至波形消失，D组与B、C组相比，SSEPs波形消失延缓，再灌注期间，B组3/6只动物SSEPs波形未恢复，C组1/6只动物SSEPs波形未恢复，D1/6只动物SSEPs波形未恢复;再灌注期间，B、C组与D组相比SSEPs潜伏期较长;HE&尼氏体染色显示，D组脊髓前角正常神经元计数（21±1.7）优于B组（15±2.3）和C组（18±2.4），与A组（24±1.5）相比存在统计学差异;与B、C组相比，D组白质空泡化程度低;免疫组化显示，C、D组MAP-2的表达优于B组。
　　结论:同时阻断猪胸降主动脉及左锁骨下动脉，可以建立可靠的脊髓缺血再灌注损伤模型;经副半奇静脉逆行灌注低温NMDA受体拮抗剂MK-801，能够实现一定程度的脊髓保护作用。