哮喘小鼠白细胞介素-13和周期蛋白D1的表达及布地奈德、尼卡地平的干预作用

摘要

目的:研究哮喘小鼠气道及肺组织中白细胞介素-13（IL-13）和周期蛋白D1(Cyclin D1)的表达情况和对气道平滑肌增生肥厚的影响，探讨布地奈德和尼卡地平对哮喘模型的干预作用;
　　方法:运用卵清蛋白(OVA)致敏和激发的方法，建立哮喘小鼠模型。选择清洁级BALB/c雌性小鼠为实验动物。60只小鼠随机分成空白组、模型组、布地组、尼卡组。观察各组小鼠气道及肺组织HE染色、Masson染色情况，用图形分析软件(Image-Pro Plus，IPP)分析各组小鼠气道平滑肌层厚度(WAm/Pi)变化情况;免疫组化法检测各组小鼠气道以及肺组织中IL-13和Cyclin D1的表达;RT-PCR法检测各组小鼠气道以及肺组织中IL-13 mRNA和Cyclin D1 mRNA的表达。
　　结果:1.肺组织病理改变:HE染色显示模型组上皮坏死脱落，气道平滑肌明显增生肥厚，上皮下纤维化，大量炎性细胞浸润。Masson染色显示模型组气道及血管周围大量胶原沉积，布地组和尼卡组上述表现明显轻于模型组;
　　2图像分析显示:与空白组(2.56±1.34)相比，模型组(9.12±2.46)、布地组(3.98±1.62)和尼卡组(6.32±1.59)气管平滑肌厚度（WAm/pi）明显增加，差异有统计学意义(P＜0.05);和模型组相比，布地组和尼卡组小鼠WAm/Pi较模型组显著降低，差异有统计学意义(P＜0.05);且布地组WAm/Pi显著低于尼卡组，差异有统计学意义(P＜0.05);
　　3.免疫组化检测IL-13的表达:与空白组(2.66±1.67)％相比，模型组(8.64±1.83)％、尼卡组(5.06±1.66)％小鼠气道及肺组织IL-13表达增多，差异有统计学意义(P＜0.05)，布地组(3.61±1.77)％与空白组比较无统计学意义(p＞0.05);与模型组相比，布地组和尼卡组IL-13的表达减少，差异有统计学意义(P＜0.05);布地组IL-13的表达低于尼卡组，差异有统计学意义（P＜0.05）;
　　4.免疫组化检测Cyclin D1的表达:与空白组(7.24±2.23)％相比，模型组(21.80±4.95)％、布地组(10.60±3.88)％和尼卡组(14.64±5.48)％小鼠气道及肺组织Cyclin D1表达增高，差异有统计学意义(P＜0.05);与模型组相比，布地组和尼卡组Cyclin D1的表达减少，差异有统计学意义（P＜0.05）;布地组和尼卡组相比，布地组Cyclin D1的表达低于尼卡组，差异有统计学意义(P＜0.05);
　　5.PT-PCR检测IL-13 mRNA的表达:与空白组(0.09±0.02)相比，模型组(0.61±0.03)、布地组(0.17±0.02)和尼卡组(0.30±0.03)小鼠肺组织中IL-13mRNA的水平增高，差异有统计学意义(P＜0.05);与模型组相比，布地组和尼卡组肺组织中IL-13mRNA的水平下降，差异有统计学意义（P＜0.05）;布地组和尼卡组相比，布地组低于尼卡组，差异有统计学意义（P＜0.05）;
　　6.PT-PCR检测Cyclin D1 mRNA的表达:与空白组(0.30±0.01)相比，模型组(1.30±0.01)、布地组(0.77±0.33)和尼卡组(0.89±0.01)小鼠肺组织中Cyclin D1 mRNA的水平增高，差异有统计学意义(P＜0.05);与模型组相比，布地组和尼卡组肺组织中Cyclin D1mRNA的水平下降，差异有统计学意义(P＜0.05);布地组和尼卡组相比，布地组低于尼卡组，差异有统计学意义（P＜0.05）;
　　7.模型组Cyclin D1和IL-13蛋白的表达呈正相关(γ=0.702，P＜0.05);气道平滑肌厚度与Cyclin D1蛋白的表达呈正相关(γ=0.915，P＜0.05);气道平滑肌厚度与IL-13蛋白的表达呈正相关(γ=0.539.P＜0.05);
　　结论:1.IL-13和Cyclin D1的蛋白及mRNA在哮喘小鼠气道及肺组织内表达增高，两蛋白表达水平呈正相关，且与哮喘气道平滑肌增生程度呈正相关。
　　2.布地奈德、尼卡地平能降低哮喘小鼠气道及肺组织中IL-13和Cyclin D1的蛋白及mRNA的表达。
　　3.布地奈德对哮喘模型的干预效果优于尼卡地平。

目录

声明

论文说明

摘要

英文缩略词表

前言

1 材料与方法

1．1 实验材料

1．1．1 实验动物

1．1．2 主要试剂

1．1．3 主要实验仪器和设备

1．2 实验方法

1．2．1 实验动物分组

1．2．2 哮喘模型的建立

1．2．3 肺组织标本的制备

1．2．4 肺组织脱水、包埋及切片

1．2．5 HE染色观察小鼠肺组织的病理变化

1．2．6 Masson染色观察各组小鼠肺组织病理变化

1．2．7 免疫组化检测小鼠气道及肺组织中IL-13、Cyclin D1的表达

1．2．8 RT-PCR测定小鼠气道及肺组织中IL-13、Cyclin D1 mRNA的表达

1．2．9 IPP(Image-Pro Plus)图像分析软件进行图像分析

1．3 统计学分析

2 结果

2．1 哮喘小鼠模型的建立以及小鼠气道及肺组织病理改变

2．1．1 各组小鼠一般情况

2．1．2 小鼠气道及肺组织HE染色、Masson染色

2．2 免疫组化检测四组小鼠气道及肺组织白细胞介素-13蛋白的表达

2．3 免疫组化检测四组小鼠气道及肺组织周期蛋白D1蛋白的表达

2．4 RT-PCR检测四组小鼠气道及肺组织白细胞介素-13 mRNA的表达

2．5 RT-PCR检测四组小鼠气道及肺组织周期蛋白D1 mRNA的表达

2．6 IPP(Image-Pro Plus)图像分析软件检测四组小鼠气道平滑肌变化情况

2．7 相关性分析结果

2．7．1 哮喘组Cyclin D1与IL-13蛋白表达的相关性分析

2．7．2 哮喘组WAm／Pi与Cyclin D1蛋白表达的相关性分析

2．7．3 哮喘组WAm／Pi与IL-13蛋白表达的相关性分析

3 讨论

3．1 小鼠哮喘气道重塑模型的制作

3．2 IL-13与哮喘气道重塑

3．3 IL-13与气道平滑肌增生肥厚在哮喘气道重塑中的作用

3．4 周期蛋白D1(Cyclin D1)与哮喘气道重塑

3．5 IL-13和Cyclin D1在哮喘的作用机制中的联系

3．6 布地奈德、尼卡地平对哮喘IL-13及Cyclin D1表达的影响

4 结论

参考文献

综述 白细胞介素13与支气管哮喘

攻读学位期间的主要成果

致谢