Klotho基因多态性及蛋白水平与CKD5期并骨密度下降相关性研究

摘要

目的:研究klotho基因多态性及蛋白水平与CKD5期并骨密度下降相关性研究。
　　方法:62例CKD5期（B组）患者和30例健康对照组（A组）患者被纳入研究。利用双能X线骨密度仪对CKD5期组患者行骨密度测量，并根据WHO骨密度分型标准对测量结果进行分组:骨量正常组（B0组，23例）、骨量减少组(B1组，22例)及骨质疏松组(B2组，17例)。采集两组病人静脉血4ml，两管分装。其中一管运用实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction，FQ-PCR)技术检测Klotho基因G-395A位点的单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism，SNP）;另外一管分离血清后利用Elisa法检测上清液中Klotho蛋白水平。比较分析各组间基因型频率、等位基因频率与Klotho蛋白及临床指标相关性。
　　结果:①所选样本Klotho基因G-395A位点基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡。Klotho基因G-395A位点多态性中，GG、GA及AA基因型频率分别为0.674（60例），0.272（27例），0.054(5例); G和A等位基因频率分别为0.799和0.201。
　　②Klotho基因G-395A基因型及等位基因频率比较中:A组和B组比较两者均无统计学意义(x2=0.449，P=0.503; x2=1.446，P=0.229)。B1组与B0组、B2组比较两者亦均无统计学意义(x2=1.171，P=0.279;x2=1.748, P=0.186; x2=1.947, P=0.163; x2=2.218, P=0.136)。B2组GA+AA基因型频率高于B0组(x2=5.736，P=0.017)，B2组A等位基因频率较B0组高(x2=7.207，P=0.007)。B1+B2组与B0组比较在基因型上无统计学意义，但A等位基因在B1+B2组中高于B0组(x2=3.696, P=0.055;x2=4.718, P=0.030)。
　　③采用方差分析比较各组Klotho蛋白水平，B组血清Klotho蛋白水平明显低于A组(F=23.544，P=0.000)，A组高于B0、B1及B2组（三组P值均＜0.01），B2组低于B0组(P=0.049)，B1与B0及B2组比较无统计学差异(P=0.669; P=0.377)。
　　④B组中血清Klotho蛋白水平与临床各生化指标无直线相关性（P均＞0.05）。
　　⑤采用二元Logistic回归分析显示，血清Klotho蛋白是CKD5期发生的保护性因素(OR=0.96，P=0.000)。血Klotho蛋白、GFR、体重及BMI为CKD5期骨密度下降的保护因素（OR分别为0.89，0.58，0.77，0.22，P均＜0.05），年龄及GA+AA型为危险因素(OR分别为3.2，14.74，P均＜0.05)。
　　结论:①在扬州地区汉族人群中存在Klotho基因G-395A多态性。
　　②Klotho基因G-395A位点A等位基因可能是CKD5期骨密度下降遗传危险因素。
　　③血清Klotho蛋白水平降低是CKD发生及骨密度下降的独立危险因素。
　　④年龄、GFR是CKD5期患者骨密度下降独立危险因素，体重及BMI是其独立保护因素。

目录

声明

摘要

中英文缩略词注释

1 绪论

2 材料和方法

2．1 材料

2．1．1 主要试剂

2．1．2 主要实验仪器

2．1．3 耗材

2．1．4 软件

2．2 实验方法与步骤

2．2．1 实验设计与分组

2．2．2 诊断标准

2．2．3 标本采集

2．2．4 实验数据收集

2．2．5 全血标本DNA的提取

2．2．6 DNA浓度检测

2．2．7 FQ-PCR方法检测基因型

2．2．8 血浆KL蛋白水平测定

2．3 统计学处理

3 结果

3．1 FQ-PCR技术检测皿启动子G-395A位点多态性

3．2 测序结果

3．3 KL基因G-395A位点基因型和Hardy-weinberg平衡符合程度

3．4 所分各组间G-395A位点基因型频率和等位基因频率比较

3．5 CKD5期骨密度改变各组间临床和生化指标比较

3．6 KL基因G-395A位点基因型之间临床和生化指标比较

3．7 KL G-395A基因多态性、骨密度改变、肾功能改变和KL蛋白水平相关性

3．8 血KL蛋白水平与临床生化指标相关分析

3．9 CKD5期发生相关危险因素回归分析

3．10 CKD5期并骨量下降(骨量减少和骨质疏松)相关危险因素分析

4 讨论

5 结论

参考文献

综述 Klotho与慢性肾脏病合并骨质疏松研究进展

致谢