热刺激诱导骨转移癌小鼠爆发痛模型的初步研究

摘要

目的:建立热刺激诱导C57BL/6骨转移癌小鼠爆发痛模型并对其进行评价。
　　方法:1.骨癌痛小鼠模型的建立:按Huang Dong[13]等的方法:培养Lewis肺癌细胞收集并计数;接种Lewis肺癌细胞于C57BL/6小鼠左侧股骨骨髓腔内，建立骨癌痛模型;因本课题组前期实验中观测到肿瘤细胞接种14天后用von Frey纤维丝检测小鼠左后足显示痛阈降低最显著，故选择在骨癌痛模型建立后第14天进行实验。2.适宜吗啡镇痛剂量的选择:选取体重18-22g的健康雄性C57BL/6小鼠24只，随机分为4组(N=6):正常组（正常小鼠）;低剂量吗啡组（小鼠左侧股骨骨髓腔接种肿瘤细胞后第14天，腹腔注射吗啡3 mg/kg）;高剂量吗啡组(小鼠左侧股骨骨髓腔接种肿瘤细胞后第14天，腹腔注射吗啡6mg/kg);对照组（小鼠左侧股骨骨髓腔接种肿瘤细胞后第14天，腹腔注射同等量的生理盐水）。在注射吗啡后0-120分钟内通过用vonFrey丝检测各组小鼠左后足痛阈值，通过比较不同剂量吗啡镇痛效果选取适宜的吗啡剂量。3.热刺激诱导爆发痛模型的建立:前步实验显示腹腔注射吗啡(6mg/kg)40分钟后可以使骨转移小鼠达到充分镇痛和适宜的热刺激时间窗(40分钟-120分钟)，选取体重18-22g的健康雄性C57BL/6小鼠24只，随机分为4组(N=6):正常组（正常小鼠，第14天后腹腔注射吗啡6mg/kg，40分钟后采用热刺激仪以55℃20s持续刺激左后肢股骨处）;假手术组（小鼠左侧股骨骨髓腔接种10ulD-Hanks液后第14天，腹腔注射吗啡6mg/kg，40分钟后采用热刺激仪以55℃20s持续刺激左后肢股骨处）;热刺激组（小鼠左侧股骨骨髓腔接种肿瘤细胞后第14天，腹腔注射吗啡6mg/kg，40分钟后采用热刺激仪以55℃20s持续刺激左后肢肿瘤部位）;非热刺激组（小鼠左侧股骨骨髓腔接种肿瘤细胞后第14天，腹腔注射吗啡6mg/kg，40分钟后在左后肢股骨肿瘤部位只接触探头不加热）。所有组用von Frey纤维丝测痛阈值、观察疼痛行为学并进行左后足行走评分，对热刺激诱导的骨转移癌小鼠爆发痛模型进行评价。
　　结果:1.骨癌痛小鼠模型成功建立，各指标与Huang Dong[13]研究相一致。2.选取高剂量组吗啡(6mg/kg)作为适宜剂量。von Frey痛阈值显示，低剂量吗啡组和高剂量吗啡组均可使骨癌痛小鼠达到完全镇痛与正常组无差异（p＞0.05），与对照组有差异(p＜0.05)，但高剂量吗啡组在更短时间内使骨癌痛小鼠达到镇痛且具有更宽的可供热刺激的时间窗(40分钟-120分钟)。3.热刺激诱导爆发痛模型的初步建立。von Frey痛阈值检测、观察疼痛行为学和后足行走评分显示:热刺激组痛阈值改变与其他各组相比存在显著差异(p＜0.05)，短时间内快速降低至最低点;热刺激组刺激后短时间内小鼠出现患肢严重跛行、频繁搔抓、舔患肢、全身抽搐和痛苦表情;热刺激组与其他各组相比存在显著差异(p＜0.05)，热刺激组刺激后出现短时间内评分显著下降(p＜0.05)，并在15分钟内恢复至镇痛后的原始分值。两因素方差分析和非参数检验进行组间比较显示，各组间存在显著差异，p＜0.05。根据爆发痛的定义[5，6，7]，热刺激组小鼠发生了爆发痛。
　　结论:1.在成功构建骨癌痛小鼠模型基础上，腹腔注射吗啡(6mg/kg)可以使骨转移小鼠达到充分镇痛和适宜的热刺激时间窗(40分钟-120分钟)。2.通过痛阈值检测、疼痛行为学和后足行走评分检测可以验证在55℃持续热刺激小鼠患肢肿瘤部位20s后可诱导骨转移癌小鼠发生爆发痛。

目录

声明

摘要

1 前言

2 材料与方法

2．1 实验动物和细胞

2．2 主要实验试剂和仪器

2．3 实验方法

2．3．1 C57BL／6小鼠骨转移癌模型的建立

2．3．2 适宜吗啡镇痛剂量的选择

2．3．3 热刺激诱发骨转移癌爆发痛

2．4 数据统计学分析

3 结果

3．1 适宜吗啡镇痛剂量的选择结果

3．2 热刺激诱导骨转移癌爆发痛

3．2．1 痛阈检测结果

3．2．2 疼痛行为学结果

3．2．3 后足行走评分结果

4 讨论

4．1 吗啡镇痛剂量的选择

4．2 热刺激参数的选择

4．3 检测方法的选择

5 结论

6 附图

参考文献

综述 爆发痛的定义，特点，评估和治疗

在读期间主要学术成果目录

致谢