鼻腔交感神经或副交感神经抑制对鼠变应性鼻炎Th1/2平衡的影响

摘要

目的:变应性鼻炎是临床常见疾病，在发展中国家发病率有逐年升高趋势，长沙10-17岁中小学生发病率约为17％。其发病机制仍未阐明，治疗对策还需进一步完善。本研究通过建立小鼠变应性鼻炎模型，分别使用交感神经抑制剂6-羟基多巴胺及副交感神经抑制剂异丙托溴铵处理变应性鼻炎小鼠，观察这些药物是否改变了鼻粘膜Th1、Th2，Treg等免疫细胞的细胞因子表达水平，进一步探素自主神经系统对鼻粘膜免疫及炎症反应的影响。
　　方法:将24只6-8周Balb/c小鼠，随机分为四组:正常对照组(A)，变应性鼻炎模型无处理组(B)、模型异丙托溴铵处理组(C)、模型6-羟基多巴胺处理组(D)，每组6只。运用卵清蛋白腹腔注射联合鼻腔攻击的方法对B、C、D组小鼠进行处理，建立小鼠变应性鼻炎模型;采用标准的临床症状评分方法对小鼠变应性鼻炎症状进行评估;使用常规病理组织学方法对鼻粘膜形态及细胞类型进行检查;运用ELISA方法检测血清中OVA-sIgE的浓度;采用免疫组化技术观察鼻粘膜中IL-4、IFN-γ、 FoxP3、VIP以及SP细胞数目的变化。
　　结果:1、应用小鼠变应性鼻炎症状评分标准进行评估，其结果显示，经卵清蛋白抗原攻击后，B、C、D组的18只小鼠中，17只小鼠符合鼠变应性鼻炎的诊断，表明了鼠变应性鼻炎模型成功建立。B组中1只小鼠没有表现出变应性鼻炎的症状，被剔除进一步实验。其平均积分分别是:A组，0.8±0.75;B组，6.4±1.14;C组，6.8±1.17;D组，6.3±1.21。各组经相应处理14天后，积分分别是:A组，0.7±0.81;B组，6.2±1.09;C组，3.8±0.98;D组，7.0±1.09。C组经异丙托溴铵处理后积分显著下降(p＜0.01)。2、血清ELISA检测结果显示，经卵清蛋白抗原攻击后的B、C、D组，血清中OVA-sIgE浓度分别为112.5±16.3ng/ml，123.5±16.6ng/ml，124.4±17.1 ng/ml，都显著高于A组(22.1±4.33 ng/ml)，差异具有统计学意义(p＜0.01)。而B、C、D组之间差异无统计学意义(p＞0.05)。各组经相应处理14天后，其A、B、C、D各组OVA-sIgE的浓度分别为26.1±4.13ng/ml，120.3±16.1 ng/ml，74.4±9.87ng/ml，130.7±16.1 ng/ml。异丙托溴铵的处理显著降低了变应性鼻炎小鼠血清的OVA-sIgE浓度(p＜0.01)。3、病理组织学检查结果显示，与对照组比较，变应性鼻炎组的鼻粘膜纤毛稀少，排列不规则，并且可见许多血管及腺体的增生和扩张，组织水肿，嗜酸性粒细胞及其他炎症细胞的浸润。异丙托溴铵的处理显著减少了嗜酸性粒细胞的浸润及腺体和血管的增生和扩张。而6-羟基多巴胺没有使鼠变应性鼻炎的病理组织学发生改变。4、变应性鼻炎模型及对照组经各种处理后，A、B、C、D各组中，鼻粘膜IL-4阳性细胞数分别为，8.2±1.45％，28.2±8.41％，12.4±3.12％，31.7±9.13％;INF-γ的阳性细胞数分别为6.1±0.35％，2.8±0.63％，3.9±0.42％，3.6±0.51％; Foxp3的阳性细胞数分别为9.5±1.81％，2.0±0.52％，7.8±0.98％，2.7±0.47％;变应性鼻炎小鼠模型组的鼻粘膜IL-4阳性细胞数显著高于对照组(p＜0.01)，经异丙托溴铵处理后变应性鼻炎小鼠鼻粘膜的IL-4阳性细胞数显著降低(p＜0.01)，而6-羟基多巴胺的处理没有改变IL-4的阳性细胞数(p＞0.05)。另一方面，小鼠模型组的Foxp3阳性细胞数显著低于对照组(p＜0.01)，经异丙托溴铵处理后Foxp3的阳性细胞数显著升高(p＜0.01)，而6-羟基多巴胺处理没有改变Foxp3的表达。尽管变应性鼻炎小鼠的INF-γ阳性细胞数显著低于对照组，但异丙托溴铵及6-羟基多巴胺的处理没有改变其表达水平(p＞0.05)。5、变应性鼻炎模型及对照组经各种处理后，ABCD各组鼻粘膜中VIP的阳性细胞及阳性纤维数分别为5.8±0.21％，26.6±6.34％，16.2±1.83％，33.5±5.51％; SP的阳性细胞及阳性纤维鼠分别为6.9±1.53％，23.5±6.02％，12.6±1.31％，25.6±8.32％。变应性鼻炎小鼠鼻粘膜的SP和VIP的表达水平均显著高于对照组(p＜0.01)，异丙托溴铵的处理显著降低了他们的表达水平，而8-羟基多巴胺没有改变他们的表达水平(p＞0.05)。
　　结论:1、运用卵清蛋白的腹腔注射联合鼻粘膜抗原攻击的方法建立小鼠变应性鼻炎模型的成功率高;2、胆碱能抑制剂不仅能有效的缓解变应性鼻炎小鼠的流涕，而且对喷嚏、鼻痒以及鼻塞也有一定疗效;3、胆碱能抑制剂不仅能够抑制副交感活性，而且能够调节鼠变应性鼻炎鼻粘膜Th2细胞优势免疫反应，增强变应性鼻炎Treg细胞因子的表达，从而发挥治疗变应性鼻炎的疗效;4、抗胆碱药没有改变Th1细胞介导的免疫反应;5、胆碱能抑制剂能显著抑制变应性鼻炎鼻粘膜神经肽SP和VIP的表达;6、交感神经抑制剂6-羟基多巴胺不能改变鼠变应性鼻炎的Th1/2细胞因子及神经肽的表达水平。

目录

声明

摘要

Abstract

Contents

ABBREVIATIONS

1 Introduction

2 Materials and Methods

2．1 Experimental Animals

2．2 Reagents

2．3 Production of the AR Model and treatment protocol

2．4 Evaluation of the Induced Allergic Symptoms

2．5 Measurement of OVA-sIgE

2．6 Wax blocking and slice production

2．7 Histological examination

2．8 Immunohistochemistry staining

2．9 Post-treatment stain or color

2．10 ELISA assay of serum OVA-specific IgE

2．1 1 Determination of the experimental data

2．11．1 Eosinophil count

2．11．2 Determination of the percentage of positive cells

3 Results

3．1 Statistical analysis

3．2 Evaluation of allergic rhinitis model by symptom score and OVA-sIgE

3．3 Symptoms of AR alleviated by Anti-cholinergic drug

3．4 Mice nasal pathology results

3．5 Eosinophil Counts in the Lamina Propria

3．6 Protein expression of IL-4，IFN-? and Foxp3

3．7 Expression of SP and VIP in allergic mice (describe it in detailed)

4 Discussion

5 Conclusion

References

Review

Acknowledgement

Personal Identity

Publications

Dedication