CD147与GLUT1在人恶性黑素瘤细胞中相互作用的研究

摘要

研究目的:
　　CD147是免疫球蛋白超家族成员中的一种跨膜糖蛋白，本实验室前期研究表明CD147能促进恶性黑素瘤增殖、侵袭、转移和血管新生，但具体机制尚不完全清楚。葡萄糖转运蛋白1(glucose transportermember1 GLUT1)是一种分布在细胞膜的跨膜糖蛋白，介导葡萄糖在细胞膜上的转运，在细胞摄取利用葡萄糖过程中发挥重要作用。本研究拟通过对CD147与GLUT1在恶性黑素瘤细胞株A375中及人恶性黑色素瘤组织中相互作用的研究，明确其作用位点，在细胞中对于葡萄糖摄取的影响，为进一步明确恶性黑素瘤发生发展的分子机制提供理论依据。
　　研究方法:
　　1.用组织芯片免疫组化技术明确CD147、GLUT1在恶性黑素瘤组织中的表达及二者相关性。
　　2.运用细胞免疫荧光技术观察A375细胞中CD147与GLUT1的定位。
　　3.构建GLUT1与CD147全长及缺失突变体的真核表达载体。
　　4.运用免疫共沉淀技术验证CD147与GLUT1相互结合，共转染GLUT1质粒及CD147的不同缺失突变体质粒至工具细胞293FT，分析CD147与GLUT1相互结合的位点。
　　5.分别用A375及A375稳定干扰CD147细胞行裸鼠皮下成瘤。运用micro PET/CT成像技术检测两组裸鼠葡萄糖摄取的变化。然后用免疫组化方法分别检测移植瘤中CD147与GLUT1的表达。
　　研究结果:
　　1.免疫组化检测出GLUT1与CD147在人恶性黑素瘤中均有表达且二者正相关，具有统计学意义（P＜0.05）。
　　2.细胞免疫荧光发现A375细胞中CD147与GLUT1在细胞膜存在共定位现象。
　　3.成功构建了GLUT1与CD147全长及缺失突变体的真核表达载体。
　　4.Co-IP验证GLUT1与CD147相互作用的结果，并进一步证实CD147与GLUT1相互结合的区段位于CD147胞外第二个Ig样结构域。
　　5.CD147干扰的A375细胞与正常A375细胞在裸鼠皮下成瘤。microPET/CT扫描显示干扰CD147后裸鼠裸鼠移植瘤摄取葡萄糖明显下(P＜0.05)。且免疫组化结果证实，干扰CD147组的移植瘤中，CD147与GLUT1的表达明显下降。
　　结论
　　CD147分子不仅能与GLUT1相互作用，CD147与GLUT1相互结合的区段位于CD147胞外第二个IgG样结构域，且CD147能正调节恶性黑素瘤细胞葡萄糖转运过程，为CD147参与恶性黑素瘤的糖酵解过程提供了进一步的理论依据。

目录

声明

论文说明

摘要

缩略语表

前言

第一章 材料与方法

1．1 材料

1．1．1 主要试剂

1．1．2 主要耗材

1．1．3 主要仪器

1．1．4 主要自制溶液配方

1．1．5 细胞株

1．2 方法

1．2．1 免疫组化

1．2．2 裸鼠成癌模型的建立

1．2．3 microPET／CT扫描

1．2．4 分子克隆与PCR

1．2．5 细胞培养

1．2．6 细胞免疫荧光

1．2．7 免疫共沉淀

1．2．8 Western Blot

1．3 免疫组化评分标准

1．4 统计学分析方法

第二章 结果

2．1 CD147与GLUT1在恶性黑素瘤组织微阵列芯片中的表达的相关性

2．2 免疫荧光检测CD147与GLUT1共定位

2．3 CD147与GLUT-1相互作用

2．4 荷瘤裸鼠肿瘤组织18F-FDG摄取的扫描

第三章 讨论

结论

参考文献

综述 关于葡萄糖转运蛋白家族的概述

攻读硕士期间研究成果

致谢