射频消融肾交感神经对高血压犬肾交感神经分泌的影响及机制研究

摘要

目的:1、观察肥胖性高血压模型犬中血浆去甲肾上腺素(NE)及肾脏局部交感神经递质NE、神经肽Y(NPY)、儿茶酚胺抑素(CST)的水平，及射频消融肾交感神经(RDN)对血压、上述递质的影响，分析上述递质水平与血压的相关关系。2、观察肥胖性高血压模型犬中肾脏血管紧张素转化酶2(ACE2)-血管紧张素(1-7)(Ang(1-7))-Mas轴的水平，及RDN对该轴表达的影响，分析该轴变化与血压及上述递质水平的相关关系。3、研究NE对人近端肾小管上皮细胞（HK-2）分泌ACE2、Ang(1-7)及Mas的影响。
　　方法:1、采用Beagle犬，以正常饮食为对照组，以高脂饮食建立肥胖性高血压犬模型，随机分为手术组(RDN)、假手术组（肾动脉造影）。于基线、建模后即术前、术后6月测定体重、心率、血压及血浆NE。术后6月处死，采用高效液相法测定血浆及肾脏NE水平，PCR、Western Blot及免疫组化法测定肾脏NPY、ACE2、MasmRNA和蛋白表达，ELISA测定肾脏CST及Ang(1-7)浓度。比较模型组与对照组，手术组与假手术组上述指标的差异。2、培养HK-2细胞，采用NE（10-8～10-4mol/L），设缓冲液为对照，干预24h，PCR、Western Blot检测ACE2、Mas mRNA和蛋白表达，ELISA测定Ang(1-7)浓度。比较NE干预对上述指标表达的影响。
　　结果:1、肥胖性高血压模型犬SBP、DBP和MAP水平明显高于对照组(P＜0.05);术后6月，手术组SBP、DBP和MAP水平显著低于假手术组(P＜0.05)。2、肥胖性高血压模型犬血浆NE水平明显高于对照组(P＜0.05);术后6月，手术组血浆及肾脏NE水平显著低于假手术组(P＜0.05)，手术组、假手术组及对照组间NPY、CST mRNA与蛋白表达均无差异(P＞0.05)。血浆及肾脏NE水平与SBP呈正相关(P＜0.05)，而NPY、CST与SBP无明显相关性(P＞0.05)。3、术后6月，手术组肾脏ACE2、Mas mRNA和蛋白及Ang(1-7)表达显著高于假手术组(P＜0.05);假手术组肾脏ACE2、Mas mRNA和蛋白及Ang(1-7)表达明显低于对照组(P＜0.05)。肾脏ACE2、Ang(1-7)、Mas与SBP均呈负相关(P＜0.05)。4、中高浓度NE(10-6mol/L～10-4mol/L)降低HK-2细胞ACE2、Mas mRNA表达水平，呈浓度依赖性，且可降低HK-2细胞Ang(1-7)表达(P＜0.05);高浓度NE(10-4mol/L)可抑制ACE2、Mas蛋白水平(P＜0.05)。
　　结论:1、肥胖性高血压模型犬血压升高，伴血浆及肾脏NE明显上升，儿茶酚胺共分泌递质NPY、CST无变化;RDN可降压，伴血浆及肾脏NE水平下降，对NPY、CST无影响。NE与SBP呈正相关。2、肥胖性高血压模型犬肾脏ACE2、Ang(1-7)和Mas表达下降;RDN可上调ACE2-Ang(1-7)-Mas轴，该轴与SBP呈负相关。3、高浓度NE可下调HK-2细胞ACE2-Ang(1-7)-Mas轴水平。

目录

论文说明

声明

摘要

符号说明

1 前言

2 材料与方法

2．1 实验材料

2．1．1 实验动物

2．1．2 主要仪器及设备

2．1．3 主要试剂

2．1．4 引物

2．2 实验方法

2．2．1 动物分组及干预

2．2．2 体重、心率及血压测定

2．2．3 标本采集及保存

2．2．4 细胞培养及分组

2．2．5 高效液相色谱法测定血浆及肾脏NE水平

2．2．6 酶联免疫吸附法(ELISA)测定组织上清CST、Ang(1-7)，细胞上清Ang(1-7)浓度

2．2．7 Western blot法检测肾脏组织中NPY、ACE2和Mas蛋白表达，HK-2细胞ACE2、Mas蛋白表达

2．2．8 免疫组化法检测肾脏组织中ACE2、Mas蛋白表达

2．2．9 荧光定量PCR法测定肾脏组织中NPY、ACE2及Mas mRNA表达

2．2．10 逆转录PCR法测定HK-2细胞ACE2、Mas mRNA水平

2．3 统计学方法

3 结果

3．1 建立高血压犬模型

3．1．1 建模及RDN前后体重变化

3．1．2 建模及RDN前后心率变化

3．1．3 建模及RDN前后血压变化

3．2 肾交感神经递质NE、NPY和CST水平

3．2．1 建模及RDN前后血浆及肾脏NE水平比较

3．2．2 RDN术后6月肾脏NPY表达变化

3．2．3 RDN术后6月肾脏CST变化

3．2．4 RDN术后6月SBP与肾脏NE、NPY和CST水平之间的直线相关分析

3．3 肾脏ACE2、Ang(1-7)和Mas水平

3．3．1 RDN术后6月肾脏ACE2表达变化

3．3．2 RDN术后6月肾脏Ang(1-7)水平变化

3．3．3 RDN术后6月肾脏Mas表达变化

3．3．4 RDN术后6月肾脏ACE2、Ang(1-7)、Mas与SBP、肾脏NE、NPY、CST水平之间的直线相关分析

3．4 NE对HK-2细胞ACE2、Ang(1-7)、Mas水平的影响

3．4．1 比较不同浓度NE干预对HK-2细胞ACE2 mRNA及蛋白表达的影响

3．4．2 比较不同浓度NE干预对HK-2细胞Ang(1-7)水平的影响

3．4．3 比较不同浓度NE对HK-2细胞Mas mRNA及蛋白表达的影响

4 讨论

4．1 射频消融肾交感神经对肥胖性高血压模型犬体重、心率及血压的影响

4．2 肥胖性高血压对肾脏局部交感神经递质NE、NPY和CST水平的影响，及RDN对模型犬血压、上述递质的影响

4．3 肥胖性高血压对肾脏局部ACE2、Ang(1-7)和Mas水平的影响，及RDN对模型犬上述轴的影响

4．4 肾交感神经递质NE对HK-2细胞ACE2、Ang(1-7)和Mas的影响

5 结论

参考文献

综述 肾交感神经对肾素血管紧张素醛固酮系统的影响

攻读学位期间主要的研究成果

致谢