齐多夫定细胞内磷酸化过程的动力学研究

摘要

目的:在细胞培养体系中研究细胞内核苷类药物磷酸化的动力学过程，以期对细胞内药物活性成分浓度变化情况有更为直接的理解。在健康人中给药，探究血浆内原药浓度与单个核细胞中原药及磷酸化产物浓度的变化规律及磷酸化动力学过程，为核苷类药物的临床用药提供参考信息。
　　方法:①建立化学合成齐多夫定一磷酸、二磷酸化物及三磷酸化物的方法，并用制备液相色谱方法分离纯化。②建立LC-MS/MS测定血浆内AZT及细胞内AZT、AZT-MP、AZT-DP和AZT-TP浓度的方法。③利用cck-8法考察齐多夫定对Molt-4和HUVCEs的细胞毒性作用，并进行Molt-4及HUVCEs细胞培养体系中齐多夫定细胞内磷酸化过程的动力学研究。④健康志愿者单次给药600 mg，用Ficoll密度梯度离心法分离血浆及外周血单个核细胞，测定给药后不同时间受试者血浆及单核细胞内齐多夫定及其磷酸化代谢物的浓度，用DAS2.0软件计算药动学参数，研究齐多夫定及其磷酸化代谢物在血浆及单个核细胞中的动力学过程。
　　结果:①利用化学合成法成功合成齐多夫定一、二、三磷酸化物。②经方法学考察，本研究中建立的测定细胞中AZT、AZT-MP、AZT-DP及AZT-TP浓度的LC-MS/MS法符合相关指导原则对生物样本测试方法的要求。③细胞培养体系中磷酸化产物的生成主要是以一磷酸化物为主，二磷酸及三磷酸化物的细胞内浓度远低于一磷酸化物。④人体试验中，血浆中齐多夫定均以原型存在，细胞内磷酸化产物以一磷酸化物为主，二磷酸及三磷酸化物的浓度很低，与体外实验结果一致;依据血浆与细胞内齐多夫定浓度计算所得的药动学参数，以及细胞内不同磷酸化产物之间的药动学参数存在差异。血浆内齐多夫定的Tmax为0.583 h，t1/2为2.022 h;细胞内齐多夫定的Tmax为1.083 h，t1/2为2.493 h;细胞内齐多夫定一磷酸化物的Tmax为1.5 h，t1/2为13.428 h;细胞内齐多夫定二磷酸化物的Tmax为1.417 h，t1/2为8.285 h;细胞内齐多夫定三磷酸化物的Tmax为1.583 h，t1/2为4.24 h。
　　结论:齐多夫定在细胞内生成三种磷酸化代谢产物，其中一磷酸化物浓度最高，半衰期最长，是体内主要的贮存形式。三磷酸化物作为主要的效应成分，浓度低，半衰期较血浆齐多夫定有明显延长，消除速度减慢。细胞内外药动学结果可以解释临床给药时间点的差异。

目录

声明

摘要

英文缩写词表

前言

第一章 齐多夫定磷酸化物的合成

1 实验材料

1．1 实验仪器

1．2 对照品及试剂

1．3 溶液的配制

2 实验方法

2．1 生物合成法

2．2 化学合成法

3 实验结果

3．1 生物合成法

3．2 化学合成法

4 结论及讨论

5 本章小结

第二章 齐多夫定及其磷酸化产物的测定方法研究

第一节 齐多夫定及其磷酸化产物测定方法的优化选择

1 实验材料

3 实验结果

第二节 血浆及细胞内齐多夫定及其磷酸化产物的LC-MS／MS测定方法的建立

1 血浆中齐多夫定的测定方法

2 细胞中齐多夫定磷酸化物的测定方法

3 细胞中齐多夫定的测定方法

4 方法学考察结果

5 结论

6 本章小结

第三章 齐多夫定在细胞内磷酸化过程的研究

第一节 cck-8法测定齐多夫定的细胞毒性

1 实验材料

2 实验方法

3 实验结果

4 结论及讨论

第二节 细胞内磷酸化过程的研究

1 实验方法

2 实验结果

3 结论及讨论

4 本章小结

第四章 齐多夫定在人体内磷酸化过程的动力学研究

1 实验材料

1．1 实验仪器

1．2 药品及试剂

1．3 溶液的配制

2 试验对象

3 实验方法

3．1 研究方案

3．2 给药方法

3．3 生物样本采集方案

3．4 样品处理及保存

4 实验结果

4．1 受试者血药浓度及细胞内药物浓度测定结果

4．2 药动学参数计算结果

5 结论及讨论

6 本章小结

全文结论

参考文献

综述 核苷类药物的体内代谢研究

攻读硕士学位期间论文发表情况

致谢