经导管射频消融去肾交感神经术对高血压犬肾小球结构及功能的影响

摘要

目的:
　　予以高脂饮食建立高血压犬模型，观察RDN术对高血压犬血压、肾功能、desmin、TGF-β1、AngⅡ、NE含量的影响以及肾小球结构的变化，探讨RDN术保护高血压犬肾小球的作用机制。
　　研究方法:
　　(1)将28只10月-12月龄比格犬分为模型组(n=22)及对照组（r=6），模型组给予高脂饮食建立高血压模型，对照组给予正常饮食。
　　(2)造模12周后，模型组2只比格犬造模不成功，数据予以剔除;模型组比格犬随机分为手术组（n=10只）和假手术组(n=10只)，手术组行RDN术，假手术组行肾动脉造影术。
　　(3)术后6月同批处死所有试验动物，留取肾脏组织，肾组织行光镜及电镜分析肾小球结构的改变;Western-Blot检测肾组织desmin与TGF-β1蛋白;RT-PCR检测肾组织desmin mRNA;高效液相色谱电化学法测定肾脏NE含量;ELISA法检测肾脏AngⅡ水平。
　　结果:
　　(1)造模12周后，手术组、假手术组术前体重、心率、SBP、DBP、MAP、尿微量白蛋白、血清NE、AngⅡ与基线及同期对照组相比明显升高(P＜0.05)。
　　(2)手术组RDN术后1月、2月、4月、6月的SBP、DBP、MAP与术前比较均明显下降(P＜0.05);手术组RDN术后2月、4月、6月的SBP、DBP、MAP与同期假手术组相比明显下降(P＜0.05)。
　　(3)手术组RDN术后3月、6月尿微量白蛋白与同期假手术组相比明显下降(P＜0.05);手术组RDN术后3月、6月尿微量白蛋白与同期对照组相比明显升高(P＜0.05)。手术组肾组织desmin蛋白及desmin mRNA含量与同期假手术组相比明显下降(P＜0.05)。手术组肾组织TGF-β1蛋白表达与同期假手术组比较明显下降(P＜0.05);与同期对照组相比明显升高(P＜0.05)。
　　(4)手术组术后6月血清AngⅡ及NE与术前及同期假手术组相比明显下降(P＜0.05)。手术组肾脏AngⅡ及NE与同期假手术组相比明显下降(P＜0.05)。
　　(5)光镜及电镜提示:手术组肾小球基膜细胞及基质轻中度增加，局灶节段性肾小球硬化，未见球性肾小球硬化，基底膜增厚，足细胞足突融合，球囊粘连。假手术组基膜细胞及基质重度增生，弥漫性球性及节段性肾小球硬化，部分肾小球球性废弃，基底膜弥漫性增厚，足细胞足突融合消失，重度球囊粘连。对照组肾小球结构基本正常。手术组肾小球球性硬化率及节段硬化率与假手术组相比明显下降(P＜0.05)。
　　结论:
　　(1) RDN短期内可以明显降低高血压犬的SBP、DBP、MAP;
　　(2) RDN可以减少尿微量白蛋白，延缓高血压引起的肾小球功能损害，减轻肾小球硬化;
　　(3) RDN可能通过降低交感神经活性及血压，减少循环与肾脏局部的AngⅡ及NE水平，从而延缓高血压犬肾小球损害。

目录

声明

摘要

符号说明

1 前言

2 材料与方法

2．1 实验材料

2．1．1 实验对象

2．1．2 饲料

2．1．3 主要试剂

2．1．4 主要仪器设备

2．2 实验方法

2．2．1 高血压犬模型的建立

2．2．2 经导管肾神经射频消融术

2．2．3 处死动物的时间、方式及组织的处理

2．3 指标检测方法

2．3．1 肌酐(血)、尿微量白蛋白、胱抑素C

2．3．2 ELISA法测定血清及肾组织AngⅡ浓度

2．3．3 血清及肾组织NE浓度-高效液相色谱-电化学检测法

2．3．4 肾组织desmin、TGF-β1蛋白-western blot

2．3．5 组织desmin mRNA-RTPCR

2．3．6 肾组织HE染色

2．3．7 肾组织Masson染色

2．3．8 肾组织PAS染色

2．3．9 肾组织PASM染色

2．3．10 肾组织电镜样品制备

2．3．11 肾小球硬化率评价

2．4 统计学处理

3 结果

3．1 各组手术前后体重、心率的变化

3．1．1 各组手术前后体重的比较

3．1．2 各组手术前后心率的比较

3．2 各组手术前后血压的变化

3．2．1 各组手术前后收缩压的比较

3．2．2 各组手术组前后舒张压的比较

3．2．3 各组手术前后平均动脉压的比较

3．3 各组手术前后肌酐、胱抑素C、尿微量白蛋白的变化

3．3．1 各组手术前后血清肌酐比较

3．3．2 各组手术前后胱抑素C比较

3．3．3 各组手术前后尿微量白蛋白的比较

3．4 各组肾组织desmin、desmin mRNA、TGF-β1蛋白表达的变化

3．4．1 各组肾组织desmin蛋白表达结果比较

3．4．2 各实验组肾组织desmin mRNA含量结果比较

3．4．3 各组肾组织TGF-D1蛋白表达的变化

3．5 各实验组血浆及肾组织NE含量的变化

3．5．1 各组手术前后血清NE比较

3．5．2 各组手术前后肾组织NE比较

3．6 各组血清及肾组织AngⅡ含量的变化

3．6．1 各组手术前后血清AngⅡ的比较

3．6．2 各组肾组织AngⅡ比较

3．7 各组肾组织光镜下病理改变

3．7．1 肾组织HE、Masson、PAS、PASM染色及电镜

3．7．2 肾小球病理评分

4 讨论

5 结论

参考文献

综述

攻读学位期间主要研究成果

致谢