过表达BNIP3抑制PINK1缺失导致的果蝇异常

摘要

帕金森病(Parkinson's disease，PD)是一种常见的中枢神经系统退行性疾病，主要症状为运动障碍以及多巴胺能神经元丢失，其发病率在神经退行性疾病中居第二，仅次于阿尔茨海默病(Alzheimer's disease，AD)。近年来许多研究证明帕金森病的发病与细胞凋亡，线粒体自噬等因素紧密相关。有研究表明分属于Bcl-2蛋白家族BH3-only亚家族的BNIP3不仅与细胞凋亡有关，而且能与自噬相关蛋白LC3直接相互作用，参与诱导线粒体自噬，这些研究结果提示BNIP3可能也与PD的发病有关。
　　目的:检测BNIP3是否与帕金森病发病相关。
　　方法:通过显微注射获得BNIP3转基因果蝇UAS-BNIP3WT，利用GAL4-UAS系统特异性的在帕金森病果蝇模型（PINK1缺失的果蝇）的不同组织中过表达BNIP3，观察统计不同基因型果蝇的表型及某些功能指标。
　　结果:1）在间接飞行肌中(IFMs)特异性过表达BNIP3能改善PINK1缺失果蝇的主要症状——翅膀异常和胸背部凹陷;
　　2）特异性的在间接飞行肌过表达BNIP3能从线粒体水平（包括线粒体功能指标ATP含量及线粒体形态）改善PINK1缺失引起的果蝇异常;
　　3）特异性的在多巴胺神经元中过表达BNIP3能抑制PINK1缺失导致的果蝇病理表型——多巴胺释放减少。
　　结论:过表达BNIP3抑制PINK1缺失导致的果蝇异常，证实了BNIP3与帕金森病的发病相关。

目录

声明

摘要

缩略词表

绪论

1 BNIP3与线粒体自噬

2 BNIP3与细胞凋亡

3 线粒体自噬，细胞凋亡与帕金森病

第一章 实验材料

1．1 果蝇品系

1．2 实验仪器

1．3 实验药品、耗材、试剂盒

1．4 实验试剂溶液

第二章 实验方法

2．1 转基因果蝇的获取

2．2 处女蝇的收集，果蝇的杂交

2．3 果蝇爬行能力检测

2．4 ATP检测

2．5 免疫印迹

2．6 果蝇肌肉组织的免疫荧光染色

2．7 多巴胺含量的测定

2．8 统计分析

第三章 实验结果

3．1 过表达BNIP3能抑制PINK1缺失或突变导致的果蝇形态学异常

3．1．1 过表达BNIP3能抑制PINK1缺失导致的果蝇异常表型

3．1．2 过表达BNIP3能抑制PINK1RNAi导致的果蝇异常表型

3．2 过表达BNIP3能显著改善果蝇PINK1缺失导致的运动缺陷

3．3 过表达BNIP3能改善PINK1缺失导致的线粒体异常

3．3．1 过表达BNIP3能改善PINK1缺失导致的线粒体形态异常

3．3．2 过表达BNIP3能抑制PINK1缺失导致的线粒体功能异常

3．4 过表达BNIP3能抑制PINK1缺失导致的多巴胺含量降低

第四章 讨论

参考文献

综述 帕金森病基因治疗研究现状

致谢