合浦珠母贝铁蛋白及26S蛋白酶体S4、S7基因的分离与分析

摘要

研究目的和意义:生物矿化是矿物晶体有序沉积在生物分泌的有机基质中的过程.珍珠是软体动物珍珠贝生物矿化的产物.珍珠除作为装饰品和化妆品原料有着巨大的商业价值外,还可能作为一种新型生物材料,成为骨移植的理想替代材料.分离和鉴定一些珍珠矿化相关功能基因,不仅有助于阐明生物矿化的机制,也为珍珠质作为生物材料的开发利用提供理论基础.研究方法:以中国生产海水珍珠的最主要贝类—合浦珠母贝(Pinctada fucata)为材料,通过RT-PCR和PCR筛选cDNA文库的方法,分别分离鉴定了与珍珠质生物矿化相关的26S蛋白酶体S4、S7两个亚基基因片段和铁蛋白基因PfFn(Ferritin of Pinctada fucata).并利用半定量PCR和原位杂交(In situ hybridization)的方法,分析了合浦珠母贝铁蛋白mRNA在外套膜及其它组织中表达水平.

目录

文摘

英文文摘

常用英文缩写

1引言

1.1珍珠的形成及分子机理

1.2与珍珠矿化相关的蛋白分子

1.2.1与珍珠矿化相关的基质蛋白及功能

1.2.2铁蛋白

1.2.3 26S蛋白酶体

1.3研究目的和意义

1.4主要研究内容及方法

2实验材料

2.1主要材料及仪器

2.2主要试剂

3实验方法及步骤

3.1组织总RNA提取

3.2半定量RT-PCR

3.2.1反转录

3.2.2 PCR反应

3.3 PCR产物回收

3.3.1样品制备（从DNA电泳胶中直接回收）

3.3.2 PCR产品纯化

3.4外套膜cDNA文库筛选

3.4.1文库及辅助噬菌体滴度测定

3.4.2文库筛选

3.4.3阳性克隆的扩增

3.4.4单克隆体内剪切

3.4.5质粒提取(碱裂解法)

3.4.6质粒的酶切（总体系20μL）

3.5基因克隆

3.5.1连接反应

3.5.2感受态细菌的制备(氯化钙法)

3.5.3细菌转化

3.6组织原位杂交

3.6.1原位杂交探针的制备

3.6.2材料准备

3.6.3溶液配制

3.6.4杂交程序

3.6.5结果观察

4实验结果与分析

4.1铁蛋白基因的分离鉴定及其mRNA的表达分析

4.1.1铁蛋白基因的序列分析

4.1.2同源性比较和生物进化关系

4.1.3铁蛋白mRNA在不同组织中的表达分析

4.1.4讨论

4.2 26S蛋白酶体亚基S4、S7基因片段的分离与分析

4.2.1 S4、S7的序列分析

4.2.2同源性分析及系统发育关系

4.2.3讨论

5结论

参考文献

文献综述

参考文献

致谢

研究成果及发表的论文

个人简历