二甲基亚砜对贫铀诱导细胞毒性的防护作用研究

摘要

目的:1、研究贫铀所引起的人支气管上皮细胞急性毒性、氧化损伤、遗传毒性的及其机理。2、研究二甲基亚砜对贫铀损伤的防护作用及其机理，为贫铀损伤的医学防护提供依据。 方法:以人支气管上皮细胞(BEAS-2B)为研究对象，采用难溶性贫铀对细胞进行染毒，以DMSO为保护剂，通过分光光度法及荧光光度法测量细胞内外活性氧的浓度，细胞抗氧化酶活性的变化，以细胞内酶的逸出、ATP酶活性的变化来证实细胞膜损伤，以研究贫铀对细胞的急性毒性作用及DMSO对贫铀毒性的抑制作用及其机制。采用慧星实验、hprt基因突变检测、测量微核多核率、细胞染色体分析来研究贫铀对细胞的遗传毒性作用及DMSO对其毒性的抑制作用。 结果1、0.5～2.5mg/mlDU作用于BEAS-2B细胞后，细胞内外的活性氧均增高，在贫铀浓度为2.0mg/ml时达到峰值，细胞上清超氧阴离子为33.43μmol/L、过氧化氢为17.31μmol/L、羟自由基为9.75μmol/L，活性氧消耗和灭活了抗氧化酶，使SOD、GSH活性降低，造成细胞膜受损，ATP酶活性降低、通透性增加，使细胞内酶LDH、GOT、ALP大量溢出。0.5％DMSO对这些影响均具有较好的抑制作用。　　2、DMSO对DU作用于BEAS-2B细胞后，可引起细胞DNA断裂，造成细胞拖尾率、彗星尾部DNA含量、尾长、尾部面积、尾距增加具有较好的抑制作用。　　3、0.5～2.5mg/mlDU可引起BEAS-2B细胞中的微核细胞、多核细胞增多，微核率可达到75‰、多核率40‰，与空白组相比有统计学意义。DMSO对贫铀所诱发的微核细胞增多有较好的抑制作用，而对贫铀所诱发的多核细胞增多无明显的抑制作用。　　4、DU作用于BEAS-2B细胞后引起hprt基因突变率增加，最高可以达到1.154‰，DMSO保护组能有效地降低hprt基因突变率。与同剂量的贫铀组相比有统计学意义　　5、染色体分析结果表明，BEAS-2B细胞染色体众数为46条，是近二倍体核型，携带有三个标志性的染色体M1，M3，M5，在连续传代至31代后，细胞染色体仍能保持稳定，是用作潜在致癌物致癌性检测和致癌机理研究的适宜靶细胞。BEAS-2B-DU转化细胞主要以二倍体为主的转化细胞群体，同时伴有不定数量的多倍体，可出现染色体畸变。14号染色体及X染色体的丢失，可能是细胞与BEAS-2B-DU细胞转化的始动、促进和进展有关。BEAS-2B-DMSO细胞核型介于BEAS-2B细胞和BEAS-2B-DU转化细胞之间说明DMSO对DU对BEAS-2B的遗传毒性具有一定的抑制作用。 结论:1、DU作用于BEAS-2B细胞后可引起细胞产生大量的活性氧，抗氧化酶活性降低，造成细胞膜氧化性损伤，通透性增加。2、DU可以导致BEAS-2B细胞遗传学损伤。3、二甲基亚砜(DMSO)对DU造成的损伤有保护作用

目录

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英文缩写词索引

前言

材料与方法

结果

1细胞存活实验

2贫铀诱发BEAS-2B细胞产生的ROS

3抗氧化酶的活性检测

4细胞膜的损伤

5BEAS-2B细胞DNA损伤

6产生的微核多核细胞

7HPRT基因突变检测

8染色体分析

讨论

结论

参考文献

综述基因功能研究策略

硕士期间发表的论文

致谢