姜黄素对人肝L-02细胞胆固醇合成及转运蛋白表达的影响

摘要

目的:研究姜黄素对人肝L-02细胞脂滴形成、胆固醇合成限速酶-HMG-CoA还原酶和转运蛋白Caveolin-1表达及细胞内胆固醇、胆固醇酯含量的影响,了解姜黄素对肝细胞胆固醇合成及转运的作用。
　　方法:取正常人肝L-02细胞,和经50％胎牛血清造模24小时建立的脂变肝细胞模型,共同作为研究对象。实验分为7组:第一组为空白对照,即正常肝细胞组;第二组为脂变肝细胞组;第三组至第六组在脂变细胞中分别加入不等量姜黄素,使姜黄素终浓度分别为0、12.5umol/l、25umol/l、50umol/l和100umol/l;第七组为阳性对照组,即脂变肝细胞加入普罗布考,使其终浓度为50umol/l;第八组为正常肝细胞加50umol/l姜黄素对照组。每组加药后继续孵育24小时。油红O染色观察每组细胞内脂滴的形成情况。高效液相色谱法(HPLC)检测细胞内胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)和胆固醇酯(CE)的含量,并计算细胞内CE/TC比值及培养基FC含量。RT-PCR法检测每组肝细胞HMG-CoA还原酶及转运蛋白caveolin-1 mRNA水平的表达,从而确定姜黄素降低细胞CE的最佳浓度,作出量效关系。然后以姜黄素的最佳浓度处理细胞不同的时间,即0小时、6小时、12小时、24小时,再分别检测各组细胞HMG-CoA还原酶和caveolin-1 mRNA水平的表达,高效液相色谱法检测细胞胆固醇含量,确定姜黄素降低细胞CE的最佳时间,作出时效关系。实验数据以±s表示,用SPSS13.0统计软件对数据进行统计分析,以P<0.05作为差异显著性标准。
　　结果:经50%胎牛血清孵育24小时后,倒置显微镜下可观察到L-02细胞脂肪变性,胞浆内充满大量可被油红O红染的脂滴,且高效液相色谱法检测细胞内外胆固醇含量均明显增加(P﹤0.05),示脂变肝细胞模型成功建立。经不同浓度的姜黄素(0umol/l、12.5umol/l、25umol/l、50umol/l、100umol/l)处理脂变肝细胞24小时,结果显示:油红O染色表明,细胞内脂滴较处理前减少。姜黄素呈浓度依赖性的降低脂变肝细胞细胞内TC、CE,增加培养基中FC含量,同时呈浓度依赖性的减少 HMG-CoA还原酶的表达、增加 caveolin-1 mRNA的表达。将100umol/l的姜黄素与脂变肝细胞共同处理0,6,12,24小时,结果显示:细胞内脂滴呈时间依赖性减少;姜黄素呈时间依赖性的降低脂变细胞内TC、CE,增加培养基中FC含量,同时呈时间依赖性的减少HMG-CoA还原酶的表达、增加caveolin-1mRNA的表达。
　　结论:
　　1、脂变人肝L-02肝细胞中总胆固醇及胆固醇酯的含量均增加。
　　2、姜黄素能降低脂变人肝L-02细胞总胆固醇及胆固醇酯含量,增加游离胆固醇的外流。
　　3、姜黄素降低胆固醇作用可能与caveolin-1的上调、HMG-CoA还原酶的下调有关。

目录

目录

中文摘要

英文摘要

前言

实 验 材 料 和 方 法

1．实验材料

2． 实验方法

3．统计学处理

结果

1．油红O染色及细胞形态观察

2．姜黄素对肝细胞内胆固醇含量的影响

3．姜黄素对脂变肝细胞胆固醇外流的影响

4．姜黄素对肝细胞HMG-CoA 还原酶表达的影响

5．姜黄素对肝细胞caveolin-1 mRNA 表达的影响

讨论

1.姜黄素对肝细胞胆固醇合成的影响

2.姜黄素对胆固醇转运的影响

结论

参考文献

综述

发 表 文 章

致谢