辛伐他汀对鼠平滑肌细胞脂质蓄积及CXCL16表达的影响

摘要

目的：观察oxLDL对鼠源平滑肌细胞脂质蓄积的影响。观察辛伐他汀对oxLDL诱导的鼠源平滑肌细胞脂质蓄积与影响。观察辛伐他汀对oxLDL诱导的泡沫细胞CXCL16表达的影响。 方法：采用体外培养的SD大鼠平滑肌细胞作为研究对象，换含0.1％血清的培养基培养后加处理因素。 　　　Ⅰ.不同浓度的oxLDL(0、20mg/L、40mg/L、60mg/L、80mg/L)与鼠源平滑肌细胞共同孵育24h和用60mg/L oxLDL与鼠源平滑肌细胞孵育不同时间即(0h、6h、12h、24h、36h)，油红O染色观察细胞内脂质蓄积情况，高效液相色谱分析法检测细胞总胆固醇蓄积情况，Western blotting检测平滑肌细胞CXCL16蛋白质的表达。 　　　Ⅱ.用60mg/L oxLDL与不同浓度的辛伐他汀(0uM、1uM、10uM、100uM)共同孵育24h，空白组作为对照组和用60mg/L oxLDL与最佳浓度的辛伐他汀100uM，同时孵育不同的时间即(0h、6h、12h、24h), 空白组作为对照组, 油红O染色观察细胞内脂质蓄积情况，高效液相色谱分析法检测细胞总胆固醇蓄积情况，Western blotting检测平滑肌细胞CXCL16蛋白质的表达。 结果：Ⅰ.oxLDL诱导的鼠源平滑肌细胞脂质蓄积与oxLDL呈剂量依赖性和时间依赖性(P<0.05)。.油红O染色显示：与空白对照组和低浓度组比较，较高浓度的oxLDL组(60mg/L、80mg/L)诱导平滑肌细胞较oxLDL低浓度(20mg/L、40mg/L)组胞内脂滴明显增多，体积增大。oxLDL(60mg/L)较长时间(24h、36h) 诱导平滑肌细胞比较短时间(0h、6h、12h) 胞内脂滴明显增多，体积增大。在oxLDL浓度为0、20mg/L、40mg/L、60mg/L、80mg/L时，HPLC检测的CE/TC的比值分别为(10.78±1.25)％、(24.40±1.84)％、(35.6±2.47)％、(56.16±1.80)％(P<0.01) (57.50±2.47)％, 在60mg/L的oxLDL作用的不同时间即(0h、6h、12h、24h、36h)，HPLC检测的CE/TC的比值分别为(10.78±1.25)％、(23.78±1.80)％、(36.95±2.39)％、(55.39±2.22)％、(58.89±4.05)％(P<0.05)。 Ⅱ.辛伐他汀能抑制鼠源平滑肌细胞对oxLDL的摄取，油红O染色可见oxLDL+simvastatin组细胞内脂滴较oxLDL组明显减少，且脂滴颗粒体积变小。在oxLDL(60mg/L)与simvastatin浓度分别为(0uM、1uM、10uM、100uM)时，HPLC检测的CE/TC的比值分别为(57.28±0.83)％、( 55.06±2.05)％、(46.20±1.44)％、( 17.86±0.97)％.正常组的CE/TC的比值为(10.78±1.25)％(P<0.05). 在oxLDL(60mg/L)与simvastatin(100uM)作用不同的时间组(0h、6h、12h、24h)，HPLC检测的CE/TC的比值分别为(57.28±0.83)％、(34.74±1.21)％、(25.96±1.31)％、(17.86±0.97)％(P<0.01). Ⅲ.在正常对照组和荷脂细胞(CE/TC<50％)组中，CXCL16蛋白表达无显著差异性(P>0.05)，而在泡沫细胞(CE/TC>50％)组中，CXCL16蛋白表达显著增加，CXCL16的表达与细胞泡沫化有关(p<0.05)。辛伐他汀能降低泡沫细胞中的CXCL16的表达，且呈剂量依赖性和时间依赖性(P<0.05)。 结论：1. oxLDL诱导鼠源平滑肌细胞脂质蓄积在一定范围内呈剂量依赖性和时间依赖性。 2.辛伐他汀明显降低泡沫细胞内的胆固醇酯与总胆固醇的比值，且在一定范围内呈剂量依赖性和时间依赖性。　 3．辛伐他汀能降低泡沫细胞中的CXCL16的表达，且在一定的范围内呈剂量依赖性和时间依赖性。