槲皮素对脂变人肝L-02细胞肉碱转移酶I及过氧化物酶体增殖物活化受体γmRNA表达的影响

摘要

目的：研究槲皮素对脂变人肝L-02细胞肉碱转移酶I及过氧化物酶体增殖物活化受体γmRNA表达的影响。 方法：用10％（V/V）医用脂肪乳注射液和10％（V/V）胎牛血清的RPMI-1640完全培养基孵育人肝L-02细胞24小时，制备肝细胞脂肪变性模型。以不同浓度（ 20μmol/l, 40μmol/l, 80μmol/l）槲皮素孵育人肝L-02细胞24小时，以浓度为40μmol/l槲皮素分别孵育模型组细胞6h,12h,24h,48h，油红Ｏ染色观察细胞形态和细胞内脂滴的形成情况，高效液相色谱法检测细胞内甘油三酯的含量，半定量RT-PCR法检测肉碱转移酶I和PPARγ的mRNA表达。实验数据以±s表示，用SPSS12.0统计软件对数据进行分析，以P<0.05作为差异显著性标准。 结果：用脂肪乳注射液孵育人肝L-02细胞24小时后，油红Ｏ染色符合肝细胞小泡性脂肪变性特征；HPLC测定细胞内甘油三酯含量明显增高，与正常组比较有显著性差异，成功的制备肝细胞脂肪变性模型。加入槲皮素（20μmol/l,40μmol/l, 80μmol/l）孵育24小时后，油红Ｏ染色胞浆内脂滴与模型组比较明显减低；HPLC结果发现：细胞内总甘油三酯含量随槲皮素剂量的增高而降低。以槲皮素（40μmol/l）浓度分别孵育模型组细胞6h,12h,24h,48h后，HPLC结果发现：细胞内甘油三酯含量随槲皮素处理时间的延长呈时间依赖性降低。半定量RT-PCR法检测各组细胞的CPT-1和PPARγ的mRNA水平。结果显示，槲皮素处理组较正常组及模型组相比，CPT-1的mRNA表达明显上升；PPARγ的mRNA表达较模型组降低，但仍高于正常组，有统计学意义。 结论： 1、脂肪变性肝细胞中甘油三酯的含量均增加； 2、槲皮素能降低脂肪变性肝细胞中甘油三酯的含量； 3、槲皮素降低甘油三酯作用可能与CPT-1的上调、PPARγ的下调有关。