DATS通过ROS介导HL-60细胞PI3K-Akt-mTOR去磷酸化和p38磷酸化过程

摘要

目的:探讨二烯丙基三硫(diallyl trisulfide,DATS)对人急性髓性白血病 HL-60细胞PI3K-Akt-mTOR及p38激酶磷酸化的影响及活性氧(reactive oxygen species, ROS)在这一过程中的作用。
　　方法:用浓度为0、50、100、150、200μM的DATS处理HL-60细胞0、1、3、6、12h,或用NADPH氧化酶特异性抑制剂加拿大麻素(apocynin, APO)、抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)、PI3K特异性阻断剂LY294002、p38特异性阻断剂 SB203580预孵育HL-60细胞30min后,再用浓度为150μM的DATS处理HL-60细胞3h,流式细胞术检测细胞内的ROS水平;蛋白印迹法检测PI3K、Akt、mTOR和p38的磷酸化水平。
　　结果:不同浓度DATS处理HL-60细胞不同时间后,细胞流式检测显示:在1-3h随着DATS处理时间和浓度的升高而升高,ROS的荧光强度在3h、150μM时达到最高峰值(89.7±0.654),其后维持在一个较高水平。Western Blot检测结果显示:用0、50、100、150、200μM的DATS作用HL-60细胞3h,PI3K、Akt、mTOR的磷酸化水平呈浓度依赖性减弱,而p38的磷酸化水平呈浓度依赖性增强,当用150μM的DATS处理1-12h, PI3K、Akt、mTOR的磷酸化水平呈时间依赖性减弱,而p38的磷酸化水平呈时间依赖性增强。NADPH氧化酶特异性阻断剂APO和抗氧化剂NAC诱导PI3K和Akt的磷酸化及 p38去磷酸化。p38阻断剂 SB203580能抑制p38磷酸化水平;PI3K特异性阻断剂LY294002能降低PI3K和Akt的磷酸化水平。
　　结论:1. DATS诱导HL-60细胞产生ROS,促进PI3K-Akt-mTOR的去磷酸化和p38磷酸化。
　　2. DATS诱导产生的ROS是PI3K-Akt-mTOR的去磷酸化和p38磷酸化的中介分子。

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主要英文缩略语索引

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英文摘要

前言

实验材料

一.主要仪器

二.主要材料与试剂

实验方法

一 主要溶液的配制

二 细胞培养及处理

三. 细胞流式仪检测活性氧的产生

四. Western blot检测蛋白表达的影响

五. 统计学方法

实验结果

一．DATS对HL-60细胞活性氧产生的影响

二．DATS对HL-60细胞PI3K磷酸化的影响及活性氧的作用

三、DATS对HL-60细胞Akt磷酸化的影响及活性氧的作用

四．DATS对HL-60细胞mTOR磷酸化的影响

五．DATS对HL-60细胞p38磷酸化的影响及ROS的作用

讨论

结论

参考文献

综述

硕士期间撰写的论文

致谢