EGCG降低人肺癌A549/DDP细胞的多药耐药性和机制的初步研究

摘要

目的：探讨EGCG对肺癌耐药细胞株A549/DDP耐药性的逆转作用及机制。 方法：MTT法检测EGCG对A549/DDP细胞的非毒性剂量以及EGCG对A549/DDP细胞药物敏感性的影响；ICP-MS法检测细胞内顺铂浓度的变化；AO/EB染色法检测EGCG联合顺铂处理A549/DDP细胞前后凋亡的形态学改变；流式细胞术检测凋亡率；RT-PCR方法观察EGCG作用前后耐药基因GST-π、MRP2mRNA表达的变化；Western Blot方法观察EGCG作用前后耐药蛋白GST-π、MRP2、Survivin表达的变化。 结果：MTT比色法显示EGCG在低于72.3μg/ml时对A549/DDP细胞的抑制率低于10％；20μg/ml、40μg/ml、60μg/ml EGCG均可增加细胞对顺铂的敏感性；ICP-MS法检测细胞内顺铂浓度随着EGCG浓度的增大逐渐增高；荧光显微镜下观察到EGCG处理后细胞体积缩小，核固缩，呈典型的凋亡形态学改变；流式细胞术显示，20μg/ml、40μg/ml、60μg/ml EGCG联合顺铂处理细胞24小时后，凋亡率逐渐增加，说明EGCG联合顺铂能够促进肺癌耐药细胞株A549/DDP凋亡；RT-PCR方法观察EGCG作用前后耐药基因GST-π、MRP2mRNA表达均减弱；Western blot方法检测发现，不同浓度的EGCG处理细胞24小时后GST-π、MRP2、Survivin蛋白表达均下调。 结论：EGCG能够部分逆转A549/DDP细胞对顺铂的耐药性，其机制可能与降低GST-π、MRP2表达从而增加了细胞内的药物浓度，下调Survivin蛋白的表达诱导凋亡有关。