ApoAI促进THP-1源性泡沫细胞ApoE分泌的研究

摘要

目的：载脂蛋白AI(Apolipoprotein AI，ApoAI)是高密度脂蛋白(high densitylipoprotein，HDL)重要的组成蛋白，可能介导了HDL的抗动脉粥样硬化(atherosclerosis，As)作用。载脂蛋白E(Apolipoprotein E，ApoE)是极低密度脂蛋白(very low density lipoprotein，VLDL)和HDL的主要组成部分，由巨噬细胞合成并分泌，在介导胆固醇流出方面具有重要作用。本项目拟通过建立动脉粥样硬化损伤部位细胞模型，观察ApoAI对THP-1源性泡沫细胞ApoE分泌的影响，探讨ApoAI与ApoE之间是否存在相互关系。 方法：(1)本实验采用聚乙二醇-6000(polyethylene glycol-6000，PEG-6000)沉淀法制备人血浆HDL，用琼脂糖凝胶电泳鉴定得到纯HDL，对所得HDL溶液脱脂，透析，浓缩，再利用凝胶过滤柱层析法分离ApoAI；(2)佛波酯(Phorbolmyfismte acetate，PMA)诱导THP-1单核细胞分化为巨噬细胞，氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein，ox-LDL)使分化后THP-1细胞荷脂，油红O染色确定细胞荷脂情况，建立动脉粥样硬化细胞模型；(3)ELISA检测不同浓度ApoAI(0，5，10，15，25μg/ml)及不同孵育时间(0，3，6，12，24h)，THP-1源性泡沫细胞ApoE的分泌；(4)RT-PCR检测细胞ApoE mRNA的表达情况。 结果：ApoAI增加THP-1源性泡沫细胞ApoE的分泌量；且ApoE蛋白质的分泌随着ApoAI孵育时间增加而增加，在24小时ApoE的分泌量达最大；在剂量试验中，ApoE的分泌量随着ApoAI剂量的增加有增加趋势，ApoAI浓度为25μmol/L时，ApoE分泌量最大；而ApoE基因的表达不受ApoAI的影响。 结论：一定浓度的ApoAI促进THP-1源性泡沫细胞ApoE的分泌，且具有时间及剂量依赖性。而在基因水平上，ApoAI对ApoE mRNA表达没有影响。