护心方对氧化低密度脂蛋白诱导的THP-1源性泡沫细胞自噬的影响

摘要

目的:观察护心方对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的泡沫细胞自噬的影响,以评估其在抗动脉粥样硬化方面的作用. 方法:160nmol/L PMA孵育THP-1细胞24h后诱导分化成巨噬细胞,加入50mg/L ox-LDL培养48h,使其转化为泡沫细胞.以护心方含药血清作用48h.分别于施加干预因素后0h、0.5h、1h、2h、4h、6h、12h、24h、48h时PBS洗脱,收集各组细胞.采用蛋白质印迹检测微管相关蛋白轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)、微管相关蛋白轻链3Ⅰ(LC3Ⅰ)、Beclin以及p62的表达;激光共聚焦显微镜观察自噬蛋白指标LC3B(LC3Ⅱ)在细胞内分布及含量. 结果:经ox-LDL诱导的泡沫细胞中油红0显示有大量脂质颗粒存在,自噬相关蛋白指标中LC-3Ⅱ/Ⅰ和Beclin-1表达显著高于空白对照组(均P＜0.001),p62的表达显著低于空白对照组(P＜0.05);而护心方干预组可使LC-3Ⅱ/Ⅰ和Beclin-i表达显著降低(P＜0.05,P＜0.001),p62的表达显著升高(P＜0.05)相对于ox-LDL刺激组.以40％护心方含药血清处理细胞,细胞的自噬指标LC3Ⅱ/Ⅰ比例升高,时间5h时达峰(P＜0.01),随后逐渐减低,在12h时仍与对照组有显著差异(P＞0.05);p62蛋白表达水平逐渐升高,时间9h达峰(P＜0.001);而Beclin蛋白表达逐渐下降,至5h时明显低于对照组(P＜0.001).激光共聚焦显微镜观察和半定量自噬表达指标LC3B(LC3Ⅱ)的平均荧光值,经ox-LDL处理的泡沫细胞组LC3B表达较空白对照组显著增加(P＜0.001);护心方干预后则见LC3B表达显著降低(P＜0.001),并可抑制LC3B向细胞浆内周围聚集. 结论:护心方能够逆转由ox-LDL诱导的细胞自噬相关蛋白的表达,改善自噬相关蛋白在细胞内的分布情况,提示护心方具有抵抗动脉硬化过程中过度自噬的作用.