紫花牡荆素对人宫颈癌HeLa细胞活性氧生成和凋亡的影响

摘要

目的:
　　研究紫花牡荆素(casticin, CAS)诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡作用,并探讨其作用机制是否涉及促进活性氧(reactive oxygen species, ROS)生成。
　　方法:
　　体外培养人宫颈癌 HeLa细胞。酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)法检测细胞组蛋白/DNA碎片和Caspase-3活性。碘化丙啶(propidium iodide, PI)染色流式细胞术(flow cytometry, FCM)定量分析细胞凋亡率(亚二倍体 DNA含量细胞百分率)。二氯荧光素二乙酯(2’7’-dichlorofluoresein diacetate, DCFH-DA)荧光探针FCM检测细胞活性氧生成。
　　结果:
　　ELISA法测定结果显示,CAS(0.5、1.0、2.0μmol/L)作用24 h显著诱导HeLa细胞组蛋白/DNA碎片增加(P<0.05),并呈浓度依赖性。PI染色FCM分析结果表明:CAS(0.5、1.0、2.0μmol/L)的细胞凋亡率分别是3.76％±0.59%、11.80%±0.79%和23.97%±1.33%,与溶媒对照组(0.1%DMSO,0.4%±0.05%)比较差异有统计学显著性意义(P<0.01)。CAS(0.5、1.0、2.0μmol/L)作用24 h,ELISA检测结果发现人宫颈癌HeLa细胞Caspase-3的活性分别是溶媒对照组(0.1% DMSO,1.00)的2.18、11.16和20.51倍。DCFH-DA荧光探针 FCM检测的结果证实:CAS(0.5、1.0、2.0μmol/L)以浓度的方式增高人宫颈癌 HeLa细胞活性氧水平(P<0.01)。N-乙酰半胱氨酸能有效拮抗CAS促进人宫颈癌HeLa细胞活性氧生成(P<0.05),并减弱其诱导细胞组蛋白/DNA碎片和细胞凋亡率增加(P<0.05)以及细胞caspase-3激活(P<0.05)作用。
　　结论:
　　1. CAS具有诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡作用。
　　2.促进细胞活性氧生成是CAS诱导HeLa细胞凋亡作用的机制之一。

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前言

材料与方法

1 材料

2 方法

实 验 结 果

3.1 CAS对人宫颈癌HeLa细胞组蛋白/DNA碎片的影响

3.2 CAS对人宫颈癌HeLa细胞凋亡率的影响

3.3 CAS对人宫颈癌HeLa细胞Caspase-3活性的影响

3.4 CAS对人宫颈癌HeLa细胞活性氧生成的影响

3.5 NAC对CAS诱导人宫颈癌HeLa细胞组蛋白/DNA碎片增加的影响

3.6 NAC对CAS诱导人宫颈癌HeLa细胞DNA断裂的影响

3.7 NAC对CAS诱导人宫颈癌HeLa细胞caspase-3活化的影响

讨论

结论

参考文献

中英文缩略词表

综述：

攻读硕士学位期间完成、发表论文情况

致谢