紫花牡荆素对人卵巢癌HO-8910细胞活性氧生成和凋亡的影响

摘要

目的：
　　观察活性氧在紫花牡荆素（Casticin, CAS）诱导的人卵巢癌HO-8910细胞凋亡中的作用，探讨CAS诱导细胞调亡是否涉及活性氧介导的线粒体凋亡诱导信号途径。
　　方法：
　　1. Annexin V-FITC/PI双染色流式细胞术(flow cytometry，FCM)分析CAS对人卵巢癌HO-8910细胞凋亡的影响；
　　2. H2DCFH-DA探针FCM检测CAS对人卵巢癌HO-8910细胞活性氧生成影响；
　　3.罗丹明123探针(Rhodamine123，Rh123)FCM分析 CAS对人卵巢癌HO-8910细胞线粒体跨膜电位的影响；
　　4. Western blot分析CAS对人卵巢癌HO-8910细胞Cyt C、Bax、Bcl-2蛋白表达和活性的影响。
　　结果：
　　1. Annexin V-FITC/PI双染色FCM分析结果显示 CAS(2.0和4.0μg/mL)处理人卵巢癌HO-8910细胞48小时的细胞凋亡率分别为：9.46±0.95％，14.47±1.47%(p﹤0.01），明显高于10 mmol/L N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine，NAC)预处理组(4.63±0.57%，5.30±0.50%)（p﹤0.01），及溶媒对照组（DMSO，0.3±0.10%）；
　　2. H2DCFH-DA荧光探针FCM分析结果表明CAS(2.0和4.0μg/mL)处理48小时的人卵巢癌HO-8910细胞H2DCFH-DA平均荧光强度分别为：36.73±1.52，57.53±2.83；明显高于联合NAC(10 mmol/L)预处理细胞的平均荧光强度（13.63±1.25，14.63±1.60( P<0.05)）；
　　3. Rh123探针标记FCM分析细胞内线粒体膜电位结果表明，CAS(2.0和4.0μg/mL)处理48小时的人卵巢癌HO-8910细胞Rh123平均荧光强度分别为12.73±1.25、18.20±1.49，明显低于NAC(10 mmol/L)预处理组平均荧光强度（56.20±2.73，59.7±1.79），及溶媒对照组（0.2%DMSO，84.67±3.73）（P<0.01）；
　　4. Western blot分析结果显示经CAS(2.0和4.0μg/mL)处理48小时的人卵巢癌HO-8910细胞后Cyt C、Bax蛋白表达上调，平均相对灰度值分别为1.604±0.327，1.781±0.21（P<0.05）与1.311±0.325、1.665±0.030（P<0.05），相比溶媒对照组（1.258±0.456，1.047±0.356）有明显的统计学差异（P<0.05）；而Bcl-2蛋白表达降低，平均相对灰度值为1.361±0.024，1.302±0.010（P<0.05），溶媒对照组为1.674±0.217。
　　结论：
　　1. CAS能够诱导人卵巢癌HO-8910细胞凋亡；
　　2. CAS诱导细胞凋亡机制可能与促进细胞内ROS生成，激活线粒体凋亡途径相关。

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