含phoN重组菌D.radiodurans的构建及其富集U(Ⅵ)性能的度验研究

摘要

含编码非特异性酸性磷酸酶基因（phoN）的细菌如柠檬酸杆菌（Citrobacterfreudii）等能有效地吸附去除废水中的重金属，但这类微生物对辐射敏感。耐辐射奇球菌（Deinoeoeeus radiodurans）是最抗辐射的生物之一，存活的辐射剂量高达15kGy。
　　利用基因工程技术将phoN克隆到D. radiodurans中，使之能在辐射环境下更大容量富集水中的U(Ⅵ)，实现铀等放射性重金属污染的有效生物修复及再资源化，具有重要的科学意义。本研究内容包括目的基因的扩增，重组穿梭表达载体的构建、重组菌的筛选、PhoN蛋白的表达及重组菌D. radiodurans富集U(Ⅵ)性能的研究等。
　　以 Salmonella enterica serovar Typhimurium基因组DNA为模板，PCR扩增得到phoN，将其克隆到pMD18T-Vector中。用Spe I、Nde I限制性内切酶对重组转移载体T-VectorphoN与穿梭载体pRADZ3分别进行双酶切，再将phoN片段和穿梭载体pRADZ3中的大片段通过T4DNA连接酶连接。经PCR与双酶切双重鉴定，证实重组穿梭载体pRADZ3phoN构建成功。转化E. coli DH5α与D.radiodurans感受态细胞，使其在正常情况下（不需诱导剂）表达PhoN蛋白，经Western blot证实phoN基因在E. coli DH5α与D. radiodurans中成功表达。
　　重组菌E. coli与重组菌D. radiodurans富集U(Ⅵ)的实验表明，重组菌对U(Ⅵ)的去除率较相应的宿主菌均有较大的提高，其中重组菌D. radiodurans对U(VI)的富集量较宿主菌D. radiodurans的增加约2倍，去除率达85.64％。
　　比较重组菌D. radiodurans与宿主菌D. radiodurans的生长曲线，表明重组穿梭质粒的导入使得重组菌的生长受到抑制。pH对重组菌D. radiodurans富集U(VI)的过程有显著影响。当pH为6时去除率达到最大值88.32%，在低pH下，去除率极低。在60min时基本达到了吸附平衡。其富集量与菌体浓度负相关，与铀起始浓度正相关。

目录

封面

声明

中文摘要

英文摘要

目录

第一章 绪论

第二章 试验材料与方法

第三章 含phoN 重组菌D. radiodurans 的构建

第四章 含phoN 重组菌D. radiodurans 富集U(Ⅵ)的结果与分析

第五章 结论与建议

参考文献

附 录 A

论文发表情况

参与项目

致谢