农杆菌介导法将Bt杀虫蛋白基因转入玉米自交系的研究

摘要

农杆菌转化法在重要的农作物水稻、小麦上取得了突破性进展.但这些报道的农杆菌介导法转化的玉米材料多为A118、B73及其衍生系,有很大的基因型限制.目前,有关农杆菌介导法将外源有利基因如抗虫、抗病、抗除草剂等基因导入东北地方优良玉米自交系的报道甚少.该论文通过优化培养条件,对以玉米自交系7922、H99、P2、Mo17、吉846、吉63等的幼胚为外植体诱导愈伤组织的几个重要影响因素进行研究,同时论文还利用β-葡萄糖苷酸酶(GUS)基因的瞬时表达和稳定表达,对影响农杆菌介导玉米愈伤组织遗传转化的几个影响因素进行研究,通过用带有Bt.抗虫基因和bar抗除草剂基因的根癌农杆菌LBA4404(ACT)转化玉米自交系7922、H99和P2的胚性愈伤组织,并对侵染后愈伤组织的筛选继代培养和生根、移载等条件进行优化.PCR检测初步证明Bt.杀虫蛋白基因已整合到玉米再生植株中.

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内容提要

前言

第一部分玉米愈伤组织受体系统的优化

1.1材料与方法

1.1.1供试材料

1.1.2培养基

1.1.3实验方法

1.2结果与分析

1.2.1培养基种类对愈伤组织诱导的影响

1.2.2不同碳源对愈伤组织诱导及继代的影响

1.2.3不同激素种类和浓度对玉米愈伤组织诱导及继代的影响

1.2.4玉米愈伤组织再生、分化培养

第二部分农杆菌介导的玉米愈伤组织转化条件的优化

2.1材料与方法

2.1.1植物材料

2.1.2培养基

2.1.3农杆菌菌液的制备

2.1.4玉米愈伤组织的转化

2.1.5 GUS基因的组织化学检测

2.1.6转基因植株的PCR检测

2.2结果与分析

2.2.1愈伤组织对Basta除草剂的本底抗性及适宜筛选的浓度

2.2.2农杆菌介导玉米愈伤组织最佳感受态的选择

2.2.3 AgNo3对农杆菌介导玉米遗传转化的影响

2.2.4不同As浓度对农杆菌介导玉米遗传转化的影响

2.2.5不同生长时期农杆菌对玉米愈伤组织转化率的影响

2.2.6不同侵染时间对玉米遗传转化的影响

2.2.7不同感染培养基对农杆菌介导玉米愈伤组织转化的影响

2.2.8抗性愈伤组织的分化、成苗

2.3抗性植株的PCR检测

第三部分结论

参考文献

图版说明

附录：

致谢