优质肉羊精液冷冻稀释液的研究

摘要

本试验对长春德惠天台种羊场引进的种公羊进行了品质评定，并对绵羊精液在常温(20-25℃)、低温(0-5℃)和39℃(CO2培养箱)条件下的稀释液配方进行了筛选。本研究还通过系列试验，对绵羊精液冷冻优化程序及稀释液中大豆磷脂添加试验进行了研究，并利用筛选出的最佳冷冻稀释液进行了受胎试验，研究结果表明：长春德惠天台种羊场的7只种公羊中76号、121号、748号、179号、2056号符合种用公羊繁殖性能要求，表明可以进行正常的配种和种用。但是种公羊1084号和275号的精液品质较差，与其它5只种羊的精液品质存在显著性差异。还有待于加强饲养管理，改善其精液品质，使其达到种用要求。 在常温(20-25℃)、低温(0-5℃)和39℃(CO2培养箱)条件下，保存在Tris稀释液中的精子活率一直显著优于其它稀释液配方，说明Tris适合于在以上三种条件下保存精液。 由37℃降温到5℃时，降温速率为0.21℃/min，3h降温平衡到5℃的方法对绵羊冷冻-解冻精子有较好的保护效果。 35℃条件下解冻后的精子活率和项体完整率显著高于在45℃、55℃和65℃条件下解冻后的精子活率和顶体完整率(P＜0.05)。当解冻温度在45℃以上时，冷冻-解冻后精子的活率和顸体完整率显著降低(P＜0.05)。35℃下用VB12解冻是生产条件中简单而有效的解冻方法。 研究表明绵羊精液颗粒冷冻稀释液适宜的最终甘油浓度为6％。当甘油的最终浓度为6％时，冷冻-解冻后的精子活率和顶体完整率最佳，与其它浓度差异显著(P＜0.05)，当最终甘油的浓度大于6％时冷冻-解冻后精子的活率和顶体的完整率开始下降(P＜0.05)，说明甘油的浓度超过6％时对精子具有一定的毒害作用。 经过对绵羊精子颗粒冷冻程序的研究，以冷冻-解冻精子活率和顶体完整率为指标，确立了绵羊精液冷冻优化程序：①精液：稀释液1：3；②两步稀释法：37℃下用基础稀释液进行稀释降温平衡到5℃再加入6％甘油；③200ml水浴平衡到5℃，即降温速率0.21℃/min降温3h；④在35℃水浴中颗粒精液以VB12为解冻液进行湿解冻。 在Tris稀释液中添加3.65％或者7.3％的大豆磷脂的稀释液精子在冷冻-解冻后具有较好的效果，与含其它浓度大豆磷脂稀释液差异显著(P＜0.05)，并且大豆磷脂的浓度为7.3％时精子项体完整率也最好(P＜0.05)。当稀释液中的大豆磷脂的浓度高于7.3％时，精子的活率和顶体完整率显著下降。所以稀释液中大豆磷脂浓度为7.3％最为理想。 溶解大豆磷脂时的温度不同会使大豆磷脂对精子的保护作用产生一定的影响，当溶解温度为60℃时，大豆磷脂具有最佳的保护效果，冷冻-解冻后的精子活率和顶体完整率最好(P＜0.05)。 利用筛选出的含有大豆磷脂的冷冻稀释液(Tris+7.3％大豆磷脂+6％甘油)和筛选出的含有卵黄的冷冻稀释液(Tris+15％卵黄+6％甘油)作配种试验，取得了较好的受胎率，受胎率分别为59.5％和52.7％，说明大豆磷脂可以替代卵黄应用于生产。

目录

文摘

英文文摘

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前言

1.1动物精液冷冻保存的概况

1.2精液冷冻保存的机理

1.3冷冻稀释液研究进展

1.3.1防冻保护剂

1.3.2缓冲物质

1.3.3糖

1.3.4奶

1.3.5卵黄

1.3.6磷脂

1.4动物精液品质评定方法研究进展

1.4.1动物精液品质评定的意义

1.4.2动物精液品质检查方法

1.5人工授精技术的研究进展

1.5.1人工授精的生产实践意义及其概况

1.5.2绵羊冷冻精液人工授精研究进展

1.6冷冻-解冻方法研究进展

1.6.1稀释比例

1.6.2稀释方法

1.6.3冷却与平衡

1.6.4冷冻速率

1.6.5解冻温度

1.7本研究的目的和意义

2材料与方法

2.1试验材料

2.1.1试验动物

2.1.2试剂和仪器

2.2试验设计

2.3试验内容与测定方法

2.3.1精液采集

2.3.2品质评定

2.3.3稀释液的配制

2.3.4稀释液的筛选

2.3.5绵羊精液冷冻优化程序研究

2.3.6添加试验

2.3.7冻精配种试验

2.3.8资料处理

3.结果与分析

3.1公羊精液的品质评定结果

3.2常温下(20-25℃)不同稀释液对精子活率的影响的试验结果

3.3低温(0-5℃)条件下不同稀释液对精子活率的影响的试验结果

3.4 39℃保存条件下不同稀释液对精子活率的影响的试验结果

3.5冷冻稀释液的筛选

3.6绵羊精液冷冻优化程序研究

3.6.1降温时间的筛选的结果

3.6.2不同解冻温度对冷冻精子品质的影响的结果

3.6.3冷冻稀释液中甘油含量添加试验结果

3.6.4冷冻优化程序的确立的结果

3.7添加试验的结果

3.7.1含有不同浓度的大豆磷脂稀释液对冷冻-解冻精子品质的影响的试验结果

3.7.2不同温度溶解大豆磷脂的稀释液对精子品质的影响的试验结果

3.8稀释剂对受胎率的影响

4.讨论

4.1公羊精液的品质评定与首受胎率

4.2不同温度条件下(常温、低温和39℃)稀释液对精子活率的影响

4.3冷冻稀释液的筛选

4.4绵羊精液冷冻优化程序研究

4.4.1降温时间的筛选

4.4.2不同解冻温度对冷冻精子品质的研究

4.4.3甘油在冷冻稀释液中的浓度对精子的影响

4.5大豆磷脂代替卵黄的冷冻稀释液对精子的保护作用

4.5.1含有不同浓度的大豆磷脂稀释液对冷冻-解冻后精子品质的影响

4.5.2不同温度溶解大豆磷脂对精子品质的影响

4.6稀释剂对受胎率的影响

4.7需要进一步解决的问题

5.结论

参考文献

致谢(Acknowledgements)