美洛昔康对人喉癌Hep-2细胞株作用的研究

摘要

目的:探讨选择性环氧酶-2抑制剂美洛昔康（Meloxicam）对体外培养的人喉癌Hep-2细胞凋亡的作用和对其生长周期的影响，以及可能的作用机制。
　　方法:体外培养的人喉癌Hep-2细胞，采用不同浓度（0mmol/L、0.4 mmol/L、0.8 mmol/L、1.2 mmol/L、1.6 mmol/L）美洛昔康作用于Hep-2细胞后，MTT比色试验及台盼兰染色法观察Hep-2细胞于不同时间（24 h、48 h、72 h）的生长以及细胞活力的变化；流式细胞仪分析不同溶度美洛昔康作用不同时间后Hep-2细胞的凋亡情况以及对细胞周期的影响，同时检测其线粒体跨膜电位的变化；Western blot检测美洛昔康处理后Hep-2细胞中bcl-2蛋白的表达情况。
　　结果:
　　1. MTT比色试验及台盼兰染色法分析结果显示，不同浓度的美洛昔康（0mmol/L、0.4 mmol/L、0.8 mmol/L、1.2 mmol/L、1.6 mmol/L）能以剂量依赖性抑制Hep-2细胞的生长增殖以及细胞活力，并且在0～24 h内呈浓度依赖性；
　　2.流式细胞仪分析结果显示，随美洛昔康浓度的增加，其凋亡率有所增加，各浓度组凋亡率差异具有统计学意义；
　　3.流式细胞仪分析结果显示，不同浓度的美洛昔康能改变 Hep-2细胞的生长周期，随溶度的增加，G1期细胞明显增加；
　　4.流式细胞仪分析结果显示，随着美洛昔康浓度的增加，细胞跨膜电位明显下降，细胞跨膜势能呈递减趋势，各浓度组之间差异有统计学意义。此外，随着药物作用时间延长，细胞跨膜电位明显下降，细胞跨膜势能呈递减趋势；
　　5. Western blot结果显示，不同浓度的美洛昔康能降低Hep-2细胞内bcl-2的水平。
　　结论:
　　1.美洛昔康能诱导Hep-2细胞凋亡，其诱导作用呈时间-剂量依赖性；
　　2.美洛昔康诱导Hep-2细胞凋亡及抑制Hep-2细胞生长的作用，可能与触发线粒体凋亡途径以及降低bcl-2表达有关。

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主要中英文缩写

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前言

实 验 材 料

1 主要实验仪器

2细胞株

3 主要实验试剂

4 其它

实 验 方 法

1. 主要试剂的配制

2 细胞的冻存、复苏、传代和培养方法

3 MTT 法检测Hep-2细胞增殖

4 台盼蓝染色检测Hep-2细胞的活力

5 Western blot检测bcl-2表达

6 流式细胞仪检测Hep-2细胞凋亡

7 流式细胞仪检测Hep-2细胞周期

8 流式细胞仪检测Hep-2细胞线粒体跨膜电位

9．统计学处理

实 验 结 果

1 美洛昔康对Hep-2细胞增殖的影响

2 美洛昔康对Hep-2细胞活力的影响

3 美洛昔康对Hep-2细胞凋亡的影响

4 美洛昔康对Hep-2细胞周期的影响

5 美洛昔康对Hep-2细胞跨膜电位的影响

6 美洛昔康对Hep-2细胞bcl-2表达的影响

讨论

1.美洛昔康对Hep-2细胞生长抑制及凋亡诱导的作用

2.美洛昔康对Hep-2细胞凋亡诱导作用的可能机制

3.选择性COX-2抑制剂防治喉癌的前景

结论

参考文献

综述： 喉癌治疗研究现状

成果目录

致谢