长春瑞滨脂质体对人喉癌耐药细胞株Hep-2/ADR耐药逆转作用研究

摘要

目的:研究长春瑞滨脂质体对人喉癌耐药细胞株Hep-2/ADR耐药逆转作用及探讨其可能存在的机制。
　　方法:以人喉癌耐药细胞株Hep-2/ADR为研究对象。分为长春瑞滨脂质体(liposomal vinorelbine，VNB-L)组、长春瑞滨(liposomalvinorelbine，VNB)组、脂质体空泡组、对照组（无药物）分别作用该细胞株，进行以下实验研究。
　　1.采用CCK8法检测Hep-2/ADR细胞株的耐药指数（RI），确定该细胞株具备多药耐药性。
　　2.比较长春瑞滨脂质体(VNB-L)和游离长春瑞滨脂质体载药系统(VNB)以及脂质体空泡组对人喉癌耐药细胞株Hep-2/ADR的增殖抑制作用，分别计算各组IC50。
　　3.RT-PCR检测长春瑞滨脂质体(VNB-L)和游离长春瑞滨(VNB)作用于人喉癌耐药细胞株Hep-2/ADR后MDR1 mRNA、GST-π mRNA表达水平变化。
　　4.western blot检测长春瑞滨脂质体(VNB-L)和游离长春瑞滨(VNB)作用于人喉癌耐药细胞株Hep-2/ADR后P-gp、GST-π蛋白表达水平变化。
　　结果:各浓度脂质体空泡组作用人喉癌耐药细胞株Hep-2/ADR抑制率均小于3％，无明显细胞毒性，同课题组前期实验相符[1]，不纳入统计分析及RT-PCR及Western blot实验。
　　1.Hep-2/ADR细胞株对DDP、5-FU、ADR的耐药指数分别为:3.76、4.37、11.37，具有多药耐药性，符合本次实验要求。
　　2.长春瑞滨脂质体(VNB-L)和游离长春瑞滨(VNB-L)分别作用人喉癌耐药细胞株Hep-2/ADR，同浓度下的VNB-L组的对耐药细胞的增殖抑制率明显高于VNB组，差异具有统计学意义（P＜0.05），VNB-L组的IC50为0.175ug/ml，VNB组的IC50为0.859ug/ml，前者IC50约为后者1/4-1/5。
　　3.在RT-PCR检测结果中，见MDR1、GST-π基因表达于Hep-2/ADR耐药细胞株，药物作用的两实验组，VNB组MDR1 mRNA、GST-πmRNA表达上调，VNB-L组MDR1 mRNA、GST-π mRNA表达下调，对比空白对照组（无药物组），差异具有统计学意义（P＜0.05）。
　　4.western blot检测结果，可见P-gp、GST-π表达于Hep-2/ADR耐药细胞株，药物作用的两实验组，VNB组作用后P-gp、GST-π表达上调，VNB-L实验组P-gp、GST-π表达下调，分别对比空白对照组（无细胞组），差异具有统计学意义(P＜0.05)，结果与PCR相符。
　　结论:
　　1.CCK8实验中可见同种浓度的VNB-L组和VNB组作用于人喉癌耐药细胞株Hep-2/ADR后，增殖抑制率呈浓度依赖关系，且前者对细胞的增殖抑制率(IR)高于后者，差异具有统计学意义(P＜0.05)，表明脂质体作为载药系统显著增加了药物的细胞毒性，提高了药效。
　　2.Hep-2/ADR细胞株稳定表达耐药相关基因及蛋白MDR1/P-gp、GST-π，再一次确定了该细胞株的耐药稳定性。VNB作用该细胞株后MDR1/P-gp、GST-π表达上调（差异具有统计学意义，P＜0.05），提示VNB引起的耐药可能与P-gp经典通路相关，并且有GST-π介导。
　　3.VNB经过脂质体包载后又能降低P-gp、GST-π蛋白表达（差异具有统计学意义，P＜0.05），提示VNB-L可通过对抗MDR1/P-gp、GST-π介导耐药途径逆转Hep-2/ADR细胞株的耐药性，为临床筛选化疗选药提供一定的实验室依据。

目录

声明

英汉缩略语名词对照

摘要

前言

1 材料与方法

1．1 材料

1．2 方法

2 实验结果

2．1 CCK8法检测Hep-2／ADR细胞株耐药指数

2．2 VNB-L及VNB对Hep-2／ADR细胞的增殖抑制作用

2．3 RT-PCR检测MDRI mRNA、GST-(π) mRNA的表达

2．4 Western blot检测P-gP、GST-(π)蛋白的表达

3 讨论

全文总结

参考文献

文献综述 纳米载药系统在肿瘤多药耐药中的应用

致谢

攻读硕士期间发表的文章