依达拉奉对大鼠重症急性胰腺炎胰腺及肾损伤保护作用的实验研究

摘要

目的：建立大鼠重症急性胰腺炎（SAP）模型，动态观察SAP胰腺、肾脏组织病理变化，观察胰腺、肾脏组织SOD、MDA含量变化、NF-κB表达情况及血清细胞因子水平变化。采用依达拉奉干预SAP大鼠，探讨依达拉奉对SAP胰腺及肾损伤氧自由基、细胞因子的影响及可能机制。
　　方法：60只健康成年雄性SD大鼠，随机分成：对照组（C组）、重症急性胰腺炎组（S组）、依达拉奉治疗组（T组），各组再按术后6、12小时时间段随机分为2个亚组。重症急性胰腺炎组以5％牛磺胆酸钠（0.1ml/100g体重）逆行胰胆管注射制作重症急性胰腺炎模型。依达拉奉治疗组为制模后立即于鼠尾静脉注射依达拉奉(3mg/kg),重症急性胰腺炎组制模后立即鼠尾静脉注射等量生理盐水，对照组开腹后仅翻动十二指肠，其余步骤同重症急性胰腺炎组。于术后6h、12h处死各组大鼠,肉眼观察胰腺和肾脏大体改变情况。采集血液标本，全自动化分析仪测定血淀粉酶(AMY)、尿素氮（BUN）及肌酐（Cr），酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测血清中肿瘤坏死因子-α( TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平。留取胰腺和肾脏组织标本，采用黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶(SOD)活性，硫代巴比妥酸比色分析法测定组织丙二醛（MDA）含量,HE染色观察胰腺及肾脏组织病理变化，免疫组化法检测胰腺和肾脏核因子-κB p65（NF-κB p65）表达情况。采用SPSS13.0统计软件建立数据资料，均数比较用完全随机设计资料的方差分析和相关分析进行统计分析，以-X±SD表示，P<0.05有统计学意义。
　　结果：⑴光镜下观察：C组胰腺及肾脏标本均未见明显病理改变；S组胰腺标本可见不同程度坏死，间质充血、水肿，炎细胞浸润；肾脏标本可见肾小球瘀血，肾小管肿胀，肾小管腔内有坏死组织和管型，间质内可见出血和炎细胞浸润。且随时间延长，胰腺及肾脏的各种病理表现呈加重趋势；T组上述病变较S组减轻。⑵S组与C组比较，各时间段（术后6h、12h）血清AMS、BUN、Cr、TNF-α、IL-6水平均显著升高（P<0.01），胰肾组织MDA均显著升高（P<0.01），胰肾组织SOD均显著降低（P<0.01），胰腺和肾脏组织病理学评分均显著增加（P<0.01）。S组胰腺和肾脏组织病理学评分随时间延长而显著增加（P<0.01）。⑶C组胰肾组织NF-κB p65微量表达，而S组表达显著上调（P<0.01），S组胰肾组织NF-κB p65表达随时间延长而上调（P<0.01）。⑷pearson相关分析显示：S组大鼠胰肾组织MDA水平与胰肾组织病理学评分及NF-κB p65表达呈正相关分别为(r=0.910、P<0.01，r=0.923、P<0.01；r=0.850、P<0.01，r=0.885、P<0.01)；S组大鼠胰肾组织SOD活性与胰肾组织病理学评分及 NF-κB p65表达呈负相关分别为(r=-0.891、P<0.01，r=-0.883、P<0.01；r=-0.865、P<0.01，r=-0.841、P<0.01)；胰腺组织病理学评分与肾脏组织病理学评分呈正相关(r=0.952，P<0.01)；S组大鼠胰肾组织NF-κB p65表达与TNF-α、IL-6呈正相关分别为(r=0.859、P<0.01，r=0.932、P<0.01；r=0.874、P<0.01，r=0.842、P<0.01)。⑸与S组比较，T组各时间段血清AMS、BUN、Cr、TNF-α、IL-6水平均显著降低（P<0.01），胰肾组织 SOD均显著升高（P<0.01），胰肾组织 MDA均显著降低（P<0.01），胰腺和肾脏组织病理学评分及NF-κB p65表达均显著下降（P<0.05）。
　　结论：①依达拉奉通过抑制氧自由基产生，下调 NF-κB的表达，抑制 TNF-α、IL-6产生，减轻损伤和炎症反应，实现对大鼠SAP的治疗作用。②依达拉奉通过抑制肾损伤时氧自由基产生，抑制 NF-κB的激活，减少TNF-α等细胞因子产生，减轻损伤和炎症反应，从而对大鼠 SAP肾损伤具有保护作用。

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前言

实验材料与方法

1 实验材料

2 实验方法

3 统计学处理

结果

1 大鼠一般情况观察

2 胰腺、肾脏组织病理学改变

3 血清AMS、BUN、Cr水平

4 血清TNF-α水平

5 血清IL-6水平

6 胰腺组织SOD、MDA含量变化

7 肾脏组织SOD、MDA含量变化

8 胰腺组织中NF-κB p65表达

9 肾脏组织中NF-κB p65表达

10 相关性分析

讨论

１ 重症急性胰腺炎大鼠模型的制作

2 重症急性胰腺炎及其导致的肾损伤

3 氧自由基与重症急性胰腺炎胰腺及肾损伤

4 核因子-κB与重症急性胰腺炎胰腺及肾损伤

5 肿瘤坏死因子-α与重症急性胰腺炎胰腺及肾损伤

6 白细胞介素-6与重症急性胰腺炎胰腺及肾损伤

7 依达拉奉对重症急性胰腺炎胰腺及肾损伤的影响及机制

结论

参考文献

附图

文献综述：重症急性胰腺炎肾损伤的发生机制

攻读学位期间的研究成果

致谢