DDP、Endostar、PA-MSHA联合腹腔循环热灌注对兔VX-2胃癌腹腔转移瘤的实验研究

摘要

目的：
　　（1）通过悬液注射法建立兔 VX-2胃癌腹腔转移模型，并分组予以 DDP、Endostar、PA-MSHA行腹腔恒温循环热灌注化疗，证实DDP、Endostar、PA-MSHA药物联合腹腔恒温循环热灌注的安全性并分析其疗效。
　　（2）通过免疫组织化学方法测定兔VX-2胃癌腹腔转移模型各组死亡标本中PCNA、VEGF的表达，探讨DDP、Endostar、PA-MSHA联合腹腔恒温循环热灌注抑癌的可能机制。
　　方法：
　　选择36只新西兰大白兔采用肿瘤悬液注射法建立兔VX-2腹膜转移瘤模型，灌注前1天测定实验动物的血常规、肝肾功能、电解质，持续观测体重、食欲等情况变化。造模后第9天，开腹探查行ePCI评分并取癌灶行HE染色，将36只实验动物随机分成6组，分别为A组：造模后予以Endostar+DDP腹腔恒温热灌注；B组：造模后予以Endostar腹腔恒温热灌注；C组：造模后予以DDP腹腔恒温热灌注；D组：造模后予以PA-MSHA腹腔恒温热灌注；E组：造模后予以Endostar+DDP+PA-MSHA腹腔恒温热灌注；F组：阴性对照组：悬液注射法造模。实验组第一次腹腔恒温热灌注后第3天重复灌注1次。阴性对照组不予腹腔恒温热灌注。测定各组实验动物第一次灌注后第4天的血常规、肝肾功能、电解质，观测其体重、食欲等情况变化。记录实验动物的生存期、不良事件及腹泻并发症发生情况。大体观察实验动物死亡标本再次行e-PCI评分，并行腹腔内粘连评分，取标本送病检HE染色以及免疫组织化学检测VEGF、PCNA表达情况。有腹水的取腹水行病理学脱落细胞图片检查。最后对上述指标进行统计学分析。
　　结果：
　　（1）各组实验动物在第1次腹腔恒温循环热灌注化疗前1天、后第4天外周动脉血血常规、肝肾功能、电解质均无统计学上差异（P＞0.05）。
　　（2）各组实验动物不良事件及并发症发生率较低。DDP、Endostar、PA-MSHA联合腹腔恒温循环热灌注化疗组E组1只实验动物在造模后31天慢性腹泻死亡, DDP联合Endostar腹腔恒温循环热灌注化疗组A组、DDP腹腔恒温循环热灌注化疗组C组、三药联合应用腹腔恒温循环热灌注化疗组E组均分别有3、2、3只实验动物有过腹泻症状，经抗生素治疗后均在1周内痊愈。
　　（3）各组实验动物生存期情况：A组生存期36.33±3.72天，B组生存期31.17±3.66天,C组生存期32.00±3.58天，D组生存期30.80±4.71天，E组生存期37.50±7.34天，F组生存期25.17±2.93天。治疗组（A、B、C、D、E组）与阴性对照组F组之间差异均有统计学意义，P值均＜0.05。联合用药A组（Endostar+DDP灌注组）与B组（Endostar灌注组）、C组（DDP灌注组）均有统计学差异，P值分别为0.33,0.44。单药灌注组B组（Endostar灌注组）与C组（DDP灌注组）、D组（PA-MSHA灌注组）之间无统计学差异（P值均大于0.05）。联合用药A组（Endostar+DDP灌注组）与E组(Endostar+DDP+PA-MSHA灌注组)比较，两者之间无统计学差异（P=0.85）。
　　（4）阴性对照组F组死亡标本解剖见典型胃癌转移瘤特征，类似人胃癌腹腔广泛转移终末期表现。与其他组比较，E组（Endostar+DDP+PA-MSHA组）腹腔转移程度较轻。有Endostar药物灌注组（包括A、B、E组）出现肝转移较少，转移结节较小，其余组死亡标本时解剖大致与阴性对照组一致。
　　（5）实验动物死亡标本ePCI评分情况：F组评分最高18.00±1.55分，E组评分最低12.00±1.79分。F组（阴性对照组）与A、B、C、D、E组之间ePCI评分两两比较均有统计学差异（P值分别为0.020,0.003,0.002,0.000,0.000）。E组（三药联用腹腔灌注组）与A、B、C、D、F组之间ePCI评分两两比较也均有统计学差异（P值分别为0.000,0.001,0.002,0.020,0.000）。其余各组间ePCI评分两两比较无统计学差异。
　　（6）实验动物死亡标本腹腔内粘连评分情况：F组评分最高3.67±0.52分，E组评分最低1.17±0.75分。F组（阴性对照组）与A、B、C、D、E组之间ePCI评分两两比较均有统计学差异（P值分别为0.000,0.000,0.000,0.001,0.000）。E组（三药联用腹腔灌注组）与B、C、D、F组之间ePCI评分两两比较也均有统计学差异（P值分别为0.004,0.001,0.000,0.000）。其余各组间ePCI评分两两比较无统计学差异。
　　（7）各组腹腔转移瘤标本之间VEGF表达的灰度值两两比较差异均具有统计学意义（P均小于0.05）。其中F组VEGF表达的灰度值（77.33±6.77）最低，提示其VEGF表达最强。E组VEGF表达的灰度值（200.17±4.26）最高，提示其VEGF表达最弱。各组实验动物死亡腹腔转移瘤标本之间PCNA表达的灰度值两两比较差异均具有统计学意义（P均小于0.05）。其中F组PCNA表达的灰度值（83.33±3.49）最低，提示其PCNA表达最强。E组PCNA表达的灰度值（184.83±3.76）最高，提示其PCNA表达最弱。
　　结论：
　　（1）本实验采用的肿瘤悬液注射法建立的兔VX-2胃癌腹腔转移瘤模型稳定，实验动物生存期长，能够为胃癌腹腔转移瘤诊疗提供稳定的实验研究基础。
　　（2）腹腔恒温循环热灌注化疗是一种安全的恶性肿瘤治疗手段，不仅能杀灭肿瘤延长生命而且能减少腹腔粘连，改善生活质量。
　　（3）DDP、Endostar、PA-MSHA三药联合应用于腹腔恒温循环热灌注起到了协同作用，可能机制是在肿瘤腹腔种植转移过程中通过下调 PCNA、VEGF的表达起到阻断癌变的作用。其具体机制有待进一步研究。

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前言

一、材料

二、方法

三、结果

五、讨论

六、结论

参考文献

腹腔热灌注化疗的新进展

成果附录

致谢