慢性心力衰竭患者外周血单核细胞锌指蛋白A20的表达及其意义的研究

摘要

背景:
　　慢性心力衰竭（chronic heart failure，CHF）是一种慢性进展性疾病，其发生发展的基本机制是心室重构，目前有研究认为神经内分泌因素、免疫和炎症激活共同参与了CHF的病理生理全过程。炎症在CHF病理生理机制中的研究已有多项报道，但机制仍不明确。研究表明，发生慢性心衰时，循环中很多炎症因子如白介素-6（interleukin-6，IL-6）、C-反应蛋白（response protection C，CRP）等均明显升高并随心衰程度加重而增加。还有学者认为，炎症因子水平对心力衰竭的进展有一定预测作用。单核细胞是机体参与免疫和炎症激活的重要细胞之一，外周血单核细胞在发生心力衰竭时的活性状态和相关机制还有待进一步研究。
　　锌指蛋白A20（Zinc finger protein of A20），简称A20，是一种胞浆蛋白，已证实参与调节体内各种炎症反应，并能抑制细胞凋亡，被认为是具有内源性保护作用的抗炎症因子。已有报道，A20在动脉粥样硬化、癌症、1型糖尿病、内毒素血症和器官移植等疾病的病理过程中起重要作用，但A20是否参与心力衰竭的炎症反应过程的研究甚少。了解CHF患者循环中炎症激活状况，以及A20在心力衰竭的炎症反应中作用和意义，能进一步阐明CHF的病理机制，为心力衰竭的防治提供临床依据。
　　目的:
　　检测CHF患者外周血单核细胞锌指蛋白A20的表达和培养上清液IL-6的浓度，测定CHF患者血浆高敏C-反应蛋白（hyper-sensitive response protection C，hs-CRP）和脑钠肽（brain natriuretic peptide,BNP）浓度，分析外周血单核细胞A20的表达与单核细胞培养上清液分泌IL-6水平、血浆中hs-CRP浓度和 BNP浓度的相关性，探讨锌指蛋白A20在CHF病理机制中的作用和意义。
　　方法:
　　选择2011年10月--2012年2月长沙市中心医院心血管内科病房因CHF住院的患者40名作为研究对象（CHF组）；选取在长沙市中心医院体检科健康体检结果正常，且在年龄和性别上与CHF组相匹配者40例作为健康对照（对照组）。常规检测肝肾功能、血糖、血脂和血常规。空腹（禁食8h以上）采外周血5ml，经肝素钠抗凝，留取血浆后，用密度梯度离心法分离出单个核细胞，在37℃，二氧化碳温箱中培养4小时，得到贴壁的单核细胞，提取上清液后，用4％多聚甲醛固定单核细胞十分钟后放置-20℃冰箱保存。采用免疫组织化学法检测单核细胞锌指蛋白A20的表达，采用酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assays,ELISA）检测单核细胞培养上清液中IL-6浓度和血浆中高敏C-反应蛋白hs-CRP，采用放射免疫法检测血浆中BNP浓度。
　　结果:
　　1、与对照组比较，CHF组患者的性别、年龄、吸烟、血压、血糖、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇和白细胞计数等无明显差异；CHF组患者总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇明显高于对照组[（5.58±1.57）mmol/L vs(4.76±0.81）mmol/L,（3.16±1.02）mmol/L vs（2.44±0.65）mmol/L,均P＜0.05]。
　　2、CHF组患者血浆 BNP浓度明显高于对照组[（875±11.67）pg/ml vs(16±0.74)pg/ml,P＜0.05）],且随着心功能级别升高，血浆BNP浓度明显增高[Ⅱ级（235±98.23）pg/ml；Ⅲ级（459±188.26）pg/ml；Ⅳ级（1019±308.46）pg/ml]（均P＜0.05）。
　　3、CHF组患者血浆 hs-CRP浓度显著高于对照组[（10.08±4.28）mg/L vs（4.29±1.11）mg/L，P＜0.05）]
　　4、CHF组患者外周血单核细胞培养上清液中IL-6浓度为[（30.1±12.28）]pg/L,显著高于对照组[（2.4±1.5）pg/L(P＜0.05)。
　　5、CHF组患者外周血单核细胞锌指蛋白 A20表达水平显著高于对照组[（7.78±3.42）%vs(0.63±0.32)%，P＜0.05]，且随着心功能级别升高，CHF组患者外周血单核细胞 A20表达明显增高[Ⅱ级（0.97±0.25）%；Ⅲ级（16.81±5.9）%；Ⅳ级（29.23±11.7）%]（均P＜0.05）。
　　6、CHF组患者组外周血单核细胞锌指蛋白A20表达水平与血浆hs-CRP浓度成明显正相关（相关系数r=0.642，P＜0.05）。
　　7、CHF组患者组外周血单核细胞锌指蛋白A20表达水平与单核细胞培养上清液中IL-6浓度成明显正相关（相关系数r=0.661，P＜0.05）。
　　8、CHF组患者外周血单核细胞锌指蛋白A20表达水平与血浆BNP浓度呈明显正相关（相关系数r=0.516，P＜0.05）。
　　结论:
　　1、慢性心力衰竭患者外周血中存在炎症激活状态，而单核细胞活化可能是导致这种激活状态的重要原因之一。
　　2、外周血单核细胞源性锌指蛋白A20参与了慢性心力衰竭的炎症过程，并与心功能损害程度密切相关。A20可能成为判断心衰程度和评估预后的重要标志物。
　　3、在慢性心力衰竭的病理机制中，外周血单核细胞源性锌指蛋白A20与神经内分泌调节机制存在相互联系，但机制尚待进一步研究。

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主要缩略语及英文索引

中文摘要

英文摘要

前言

材料与方法

1材料

1.1研究对象

1.2实验器材与试剂

2研究方法

2.1标本收集及处理

2.2外周血单核细胞的分离、培养

2.3免疫组化方法检测外周血单核细胞A20蛋白表达

2.4外周血单核细胞上清液IL-6检测操作流程

2.5酶联免疫吸附法测定血浆hs-CRP,

3统计方法

实验结果

1研究对象一般资料的比较

2CHF组与对照组血浆BNP浓度的比较

3CHF组与对照组血浆hs-CRP浓度的比较

4CHF组与对照组外周血单核细胞培养上清液IL-6浓度的比较

5CHF组与对照组外周血单核细胞A20浓度的比较

6CHF组患者组外周血单核细胞锌指蛋白A20表达与血浆hs-CRP浓度相关性分析

7CHF组患者组外周血单核细胞锌指蛋白A20表达与单核细胞培养上清液IL-6浓度相关性分析

8CHF组患者组外周血单核细胞锌指蛋白A20表达与血浆BNP浓度相关性分析

讨论

结论

参考文献

综述

攻读学位期间发表的论文

致谢