硫化氢对蝮蛇毒致大鼠急性肺损伤氧化应激的调节作用

摘要

目的： 腹腔注射蝮蛇毒素建立急性肺损伤模型，观察增加或减少H_2S的含量对氧化保护及氧化损伤指标的影响，探讨H_2S/CSE体系对蝮蛇毒素致大鼠急性肺损伤氧化应激的调节作用。
　　方法： 1.分组：采用完全随机设计将36只雄性清洁级SD大鼠分成6组，每组6只，分别为：①生理盐水对照组(N组)；②蝮蛇毒素组(S组)；③蝮蛇毒素＋低剂量NaHS组(S+L组)；④蝮蛇毒素＋中剂量NaHS组(S+M组)；⑤蝮蛇毒素＋高剂量NaHS组(S+H组)；⑥蝮蛇毒素＋PPG组(S+PPG 组)。 2.方法：①将N组腹腔注射等容积生理盐水，其余组分别腹腔注射蝮蛇毒素。②3h后，N组和S组分别腹腔注射等容积生理盐水；S+L, S+M, S+H组和S+PPG组，分别腹腔注射0.78mg/kg,1.56mg/kg和3.12mg/kg剂量的NaHS和30mg/kg剂量的PPG。③6h 后，将各组实验动物处死，采集心脏血并分离留取血清，取相应肺组织留作标本。④肺组织HE染色光镜观察病理学变化并行病理学评分，测定肺组织湿/干重比，去蛋白法检测血浆H_2S含量，亚甲基蓝法测定肺组织CSE活性，WST-1法测定肺组织匀浆超氧化物歧化酶(SOD)活力，酶促反应谷胱甘肽消耗法测定肺组织谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)活力，酶联免疫法(ELISA)法测定肺组织8-异构前列腺素(8-iso-PGF2α)含量。
　　结果： 1.肺组织湿/干重比(W/D)变化：与N组相比较，S组W/D值升高(P0.01)。与S组相比较，不认为S+L组W/D值下降存在差异 (P0.05)；S+M, S+H组W/D值均有明显下降(P0.01)；S+PPG组W/D值升高(P0.05)。 2.光镜下肺组织病理学变化及肺损伤病理评分(IQA)：与N组正常肺组织相比，S组肺泡结构明显紊乱、破坏，肺泡结构不完整，明显肺泡水肿，大量透明膜形成，肺间质明显增厚，肺间质及肺泡大量红细胞及粒细胞浸润，可见肺不张，IQA显著升高(P0.01)。与S组相比较，S+L组肺组织损伤未见明显改善 (P0.05)，S+M,S+H组上述肺损伤情况有所减轻，肺泡结构基本完整，但仍见肺泡间隔增厚，炎细胞浸润，肺泡腔内有少量红细胞漏出，偶见透明膜，IQA明显下降(P0.01)；S+PPG组肺损伤明显加重，肺泡塌陷及肺不张明显，多量肺泡见广泛透明膜形成，IQA升高(P0.05)。 3.血浆H_2S含量及肺组织CSE活性变化：与N组比较，S组血浆H_2S含量和肺组织CSE活性明显降低(P＜0.01)。与S组比较，S+L组血浆 H_2S含量和肺组织CSE活性未见明显变化(P＞0.05)，S+M, S+H组血浆H_2S含量和肺组织CSE活性均显著升高(P＜0.01)；S+PPG组血浆H_2S含量及肺组织CSE活性降低(P＜0.01或 P＜0.05)。 4.肺组织匀浆SOD及GSH-Px活力变化：与N组相比较，S组肺组织匀浆SOD及GSH-Px活力明显下降(P0.01)。与S组相比较，不认为 S+L组肺组织匀浆SOD及GSH-Px活力升高存在差异(P0.05)，S+M, S+H组肺组织匀浆SOD及GSH-Px活力均有明显上升(P0.01)；S+PPG组肺组织匀浆SOD及GSH-Px活力减低(P0.05或 P＜0.05)。 5.肺组织匀浆8-异构前列腺素(8-iso-PGF2α)含量的变化：与N组相比较，S组肺组织8-iso-PGF2α含量明显升高(P0.01)。与S组相比较，不认为S+L组肺组织8-iso-PGF2α含量下降存在差异(P0.05)，S+M, S+H组肺组织8-iso-PGF2α含量均有明显下降(P0.01)；S+PPG组肺组织8-iso-PGF2α含量升高(P0.01)。
　　结论： 1.外源性补充H_2S，蝮蛇毒染毒大鼠SOD与GSH-Px水平上升，8-isoPGF2a水平下降，肺损伤减轻；而抑制H_2S生成，蝮蛇毒染毒大鼠 SOD与GSH-Px水平下降，8-isoPGF2a水平上升，肺损伤加重。 2. H_2S可能通过改善氧化/抗氧化系统之间的失衡状态，减轻蝮蛇毒染毒后大鼠急性肺损伤的程度。

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引言

实验材料与方法

1. 实验材料

1.1实验动物

1.2实验试剂

1.3实验器材

2.实验方法

2.1实验动物分组

2.2建立实验动物模型

2.3大鼠标本采集及标本的初步处理

2.4检测指标及检测方法

3．统计分析

实验结果

1．实验大鼠一般情况观察

2．肺组织病理组织学变化

2.1大体肉眼观

2.2光镜下肺组织病理组织学观察及肺损伤病理评分（IQA）

3．肺组织湿/干重比（W/D）变化

4．血浆H2S含量和肺组织CSE活性变化变化

5、肺组织匀浆SOD及GSH-Px活力变化：

6、肺组织匀浆8-iso-PGF2α含量的变化：

讨论

1. 蝮蛇毒素与ALI

2. 氧化应激与ALI

3. H2S与ALI及氧化应激的关系

结论

参考文献

综述：

研究生期间发表论文及获奖情况

致谢