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GnRH、SS及其受体的表达在颅脑火器伤下急性末端回肠炎中的变化

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前言

实验材料

1. 主要实验仪器及耗材

2.主要实验试剂

3. 试剂盒组成

实验技术路线图

实验方法

一、动物模型的制作

二、外周血及组织的获取与保存

三、ELISA实验原理

四、样本的处理及要求

五、ELISA法检测实验犬血浆中GnRH、SS的浓度

六、Western blot检测A,B,F组实验犬GnRH受体和SS受体的表达

七、统计学处理

实 验 结 果

一、GnRH、SS表达水平的变化

二、GnRH受体及SS受体的表达检测

三、GnRH、SS与其受体相关性比较

讨论

结论

参考文献

综述

参考文献:

硕士期间发表的论文

致谢

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摘要

目的:研究实验犬在各种应激中促性腺激素释放激素(GnRH)、生长抑素(SS)浓度的变化及其受体在实验性急性末端回肠炎中的表达,初步探讨应激与激素及其受体的内在联系,揭示应激与肠道疾病的相关性。
  方法:选用健康成年雄性杂种犬40只,随机分成8组,每组5只:常温常湿正常血糖组(A组)、常温常湿高血糖组(G组)、高温高湿高血糖组(B组)、高温高湿正常血糖组(H组)、常温常湿正常血糖颅脑火器伤组(C组)、常温常湿高血糖颅脑火器伤组(D组)、高温高湿正常血糖颅脑火器伤组(E组)、高温高湿高血糖颅脑火器伤组(F组)。C、D、E、F组分别给予手枪弹颅脑火器伤造模。
  造模后立即将犬仰卧位固定于手术台上,并行气管插管、心电监护、心肺复苏等抢救措施,监测伤后心率、血压等生命体征;除心脏挤压及人工呼吸气囊挤压抢救外,不做其他处理。在无菌条件下立即行腹部手术,剖腹寻找回盲部,切取1-3cm末端回肠组织立即离心保存,然后将残端吻合。根据时间梯度:0小时、0.5小时、1小时、1.5小时、2小时,各组实验犬每只采集外周血5个样本,立即离心保存。在此过程中尽量延缓实验犬生命,予以静脉补充液体。采用酶联免疫吸附试验(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA)定量检测外周血中GnRH和SS的浓度变化;采用Western blot检测末端回肠组织中GnRH受体、SS受体在A、B、F组中各时间点的表达。
  结果:1.术后各组实验犬血浆中GnRH浓度的变化:0h时8个实验组中各实验犬血浆中GnRH浓度差异不明显;在0.5h时各组实验犬血浆中GnRH浓度明显下降,考虑与其自身调节有关;随应激后时间延长 GnRH浓度呈现递增趋势,且明显超过起始浓度(0h);
  2.术后各组实验犬血浆中SS浓度的变化:0h时8个实验组中各实验犬血浆中SS浓度差异不明显;在0.5h时各组实验犬血浆中SS浓度明显下降,考虑与其自身调节有关;随应激后时间延长SS浓度呈现递增趋势,且明显超过起始浓度(0h);
  3.术后A、B、F组末端回肠组织GnRH受体、SS受体的表达变化:采用Westernblot分析末端回肠组织GnRH受体、SS受体的表达发现,在急性应激状态下,GnRHR、SSTR表达均有增多的趋势;且GnRH受体、SS受体与对应GnRH浓度、SS浓度呈现正相关性。
  结论:1.颅脑火器伤下急性末端回肠炎血浆中GnRH浓度升高及其受体的表达增多;
  2.颅脑火器伤下急性末端回肠炎血浆中SS浓度升高及其受体的表达增多;
  3. GnRH、SS及其受体参与了应激对急性末端回肠炎的调控,且在一定时间内呈现强度正相关。

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