CGRP抑制血管紧张素II促血管平滑肌细胞能量代谢及信号通路

摘要

目的:观察降钙素基因相关肽(CGRP)对血管紧张素 II(AngII)诱导血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖过程中能量代谢的影响及其机制,探索该作用与细胞外信号调节激酶(ERK1/2)和AMP激活的蛋白激酶(AMPK)相关的信号通路。
　　方法:组织贴块法体外培养SD大鼠胸主动脉VSMCs,取第3-10代用于实验。分别用CGRP或/和AngII处理细胞。噻唑蓝比色法(MTT)及细胞计数法观察CGRP对AngII诱导大鼠VSMCs增殖的影响;Janus Green B染色观察细胞线粒体数目及形态;ATP测试试剂盒检测细胞内ATP含量。油红O染色检测细胞内脂质含量;Western blot检测细胞p-AMPK、p-ERK1/2的表达。
　　结果:CGRP预处理能降低AngII诱导的大鼠VSMCs的生存率(p﹤0.05),同时拮抗AngII引起细胞内线粒体增多、ATP水平升高、脂质聚集的作用,在此过程中伴随细胞内p-AMPK、p-ERK1/2表达下调(p﹤0.05);CGRP8-37(CGRP受体拮抗剂)能拮抗CGRP对AngII促增殖,促代谢的抑制作用(p﹤0.05);PD98059(ERK1/2抑制剂)能部分拮抗CGRP对p-AMPK的抑制作用(p﹤0.05)。
　　结论:CGRP能显著抑制AngII诱导大鼠VSMCs的增殖过程中的能量代谢,其细胞内信号通路可能涉及到CGRP—CGRP R1----MEK—ERK1/2----p-AMPK信息传递链。

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主要英文缩略语索引

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英文摘要

前言

实 验 材 料

一、实验动物

二、主要试剂

三、主要仪器

实 验 方 法

1.大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞的培养

2.实验分组及处理因素

3.MTT法（四甲基偶氮唑盐比色法）检测细胞增殖

4. 细胞计数检测细胞增殖

5. Janus Green B染色观察细胞内线粒体

6.细胞内ATP的测定

7.油红O染色

8.Western blot 检测CGRP干预下细胞增殖相关蛋白的表达

9.图象和统计学处理

实 验 结 果

1.大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞的形态及其鉴定

2. CGRP预处理对AngII孵育VSMCs不同时间后细胞增殖的影响

3 CGRP对AngII刺激下细胞线粒体数量的影响

4. PD98059对AngII或CGRP诱导的血管平滑肌细胞ATP含量的影响

5. CGRP对AngII诱导的血管平滑肌细胞脂质含量的影响

6. AngII作用下细胞p-ERK1/2、p-AMPK表达的影响

7. CGRP对AngII诱导的血管平滑肌细胞p-AMPK，p-ERK1/2表达的影响

8．PD98059对AngII或CGRP诱导的血管平滑肌细胞 p-ERK1/2、p-AMPK表达的影响

讨论

结论

参考文献

文献综述

论 文 成 果

致谢