梅毒螺旋体Tp92蛋白的抗原表位筛选与鉴定

摘要

目的：筛选和鉴定梅毒螺旋体(Treponema pallidum, Tp)Tp92蛋白的B、Th和联合B-Th细胞抗原表位，为深入探讨这些表位在梅毒表位疫苗中的作用奠定基础。
　　方法：
　　(1)从GenBank获取Tp92蛋白氨基酸序列，预测其信号肽序列；采用亲水性、柔韧性、抗原指数及表面可能性方案，以IEDB和Bcepred软件分析工具综合预测Tp92蛋白的B细胞表位；以RANKPEP、SYFPEITHI软件预测综合预测Tp92蛋白的HLA-DRBl限制性Th细胞表位；根据上述结果综合预测Tp92蛋白的联合B-Th细胞表位。
　　(2) RP—HPLC人工合成和纯化预测的表位多肽，质谱分析和鉴定合成多肽。
　　(3)以梅毒患者血清(同时设健康人血清对照)，用间接ELISA鉴定预测Tp92蛋白的B细胞表位或联合B-Th细胞抗原表位。
　　(4)分离培养梅毒患者和正常人外周血单个核细胞(PBMC)，以预测合成的Th或联合 Th-B细胞抗原表位刺激培养的PBMC，同时设 ConA(阳性对照)和RPMI-1640(阴性对照)刺激，用CCK-8淋巴细胞增殖试剂盒检测培养PBMC中淋巴细胞增殖水平，鉴定Tp92中预测的T细胞表位；同时以ELISA试剂盒检测培养的淋巴细胞分泌INF-γ和IL-4的水平，以鉴定Th细胞表位的类型。
　　结果：
　　(1)综合分析计算机预测方案，筛选出P1(Tp9224-39AA)、P2(Tp92332-347 AA)、P3(Tp92520-536 AA)、P4(Tp92575-588 AA)、P5(Tp92103-118 AA)、P6(Tp92694-712 AA)为Tp92候选B细胞表位；P5(Tp92103-118 AA)、P6(Tp92694-712 AA)、P7(Tp92668-680 AA)、P8(Tp92300-313 AA)、P9(Tp92396-410 AA)为Tp92候选Th细胞表位；P5、P6为候选联合Th-B表位。
　　(2)经RP-HPLC纯化及纯度分析，合成多肽纯度均大于90％；质谱分析合成多肽分子量测定值与理论值一致。
　　(3) ELISA分析表明，预测的P1、P2、P3、P4、P5、P6均与梅毒患者血清反应呈阳性，而与健康人血清不反应。
　　(4)淋巴细胞增殖试验表明，P6、P7、P9能诱导梅毒患者淋巴细胞明显增殖，而不能诱导正常人淋巴细胞增殖；P6、P7、P9诱导梅毒患者淋巴细胞产生较高水平IFN-γ；P5、P6、P7、P8、P9均未能诱导梅毒患者淋巴细胞明显产生IL-4。结论：
　　本研究初步得出以下结论：
　　(1) P1、P2、P3、P4、P5、P6为Tp92蛋白潜在的特异性B细胞表位，尤其是P3和P6；
　　(2) P6、P7、P9为Tp92蛋白潜在的HLA-DRBl限制性特异性Th1型细胞表位；
　　(3) P6为Tp92蛋白潜在的特异性联合B-Th1细胞表位。

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实验材料

实验方法

结果

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结论

参考文献

附录一 各合成多肽的纯化分析结果

附录二 各合成多肽的质谱分析结果

综述蛋白质抗原表位研究方法的进展

在读期间科研成果

致谢