以β-葡聚糖为佐剂的脑膜炎多糖结合疫苗制备及其免疫原性研究

摘要

流行性脑脊髓膜炎是由脑膜炎奈瑟氏球菌引起的化脓性脑膜炎，此病分布范围广，致死率高，具有耐药性。
　　但是单纯的脑膜炎双球菌荚膜多糖（简称CPS）属胸腺非依赖性抗原不能诱导免疫记忆，且只适用于成人，不适合常规接种两岁以下儿童。将载体蛋白与CPS共价结合可使其转化成T细胞依赖性抗原，从而刺激合成T细胞依赖性抗体，不仅可以产生免疫记忆，还能提高免疫球蛋白IgG的抗体比例及抗体亲和力的成熟，这种多糖结合疫苗可适用于成人，也适用于婴幼儿。
　　然而，目前这些结合疫苗均存在接种剂量较大、免疫效率不高的缺点，因此，亟待研发效率更高和免疫原性更强的新型结合疫苗。
　　尽管?-葡聚糖佐剂已经被用来提高抗原的免疫原性，但是将佐剂与结合疫苗化学偶联或物理混合的研究几乎没有被研究。?-葡聚糖可以促进细胞免疫和体液免疫，通过与特殊受体如CR3和Dectin-1等结合，可以激活巨噬细胞，影响细胞因子的释放。本次研究中，活化的CPS与破伤风类毒素（TT）化学偶联成CPS-TT，?-葡聚糖与高碘酸钠氧化羟基被氧化成醛基，再将?-葡聚糖偶联CPS-TT生成CPS-TT-G。将?-葡聚糖与CPS-TT物理混合得到CPS-TT/G1和CPS-TT/G2。使用红外色谱，核磁共振，动态光散射仪，高效液相色谱分析等对产物进行结构分析。将CPS，CPS-TT，CPS-TT/Al，CPS-TT-G，CPS-TT/G1和CPS-TT/G2免疫小鼠后运用ELISA方法测定小鼠血清中的抗体滴度，研究发现CPS产生的CPS特异性的IgM抗体滴度远远低于CPS-TT和CPS-TT-G的抗体滴度，这表明将TT偶联到CPS上可大大增加CPS特异性的IgM抗体滴度，同时注射第三针CPS-TT-G产生的CPS特异性IgG/IgM比率远远高于CPS-TT。这说明加入?-葡聚糖使抗体的合成更多地从IgM转为合成IgG。将CPS-TT-G免疫小鼠21d后得到的CPS特异性IgG抗体滴度是CPS-TT的8.2倍。这可能是将?-葡聚糖与CPS-TT化学偶联可保证二者同时到达抗原递呈细胞。然而，将?-葡聚糖与CPS-TT物理混合后，CPS特异性IgG抗体滴度降低了，这可能是因为将?-葡聚糖与CPS-TT物理混合后，?-葡聚糖会优先到达抗原递呈细胞，占据B细胞结合位点。这充分说明，将?-葡聚糖化学偶联是提高结合疫苗CPS特异性抗体滴度的一种很好的策略。

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第1章 绪 论

1.1 生物制品

1.2 脑膜炎双球菌疫苗

1.3 脑膜炎球菌疫苗的β-葡聚糖修饰

1.4 β-葡聚糖修饰产物的分离纯化技术

1.5 β-葡聚糖修饰产物的常用表征方法

1.6 佐剂修饰产物的免疫原性

1.7 论文的立题思想

第2章

2.1 引言

2.2 试剂与仪器

2.3 实验方法

2.4 结构分析和含量测定方法

2.5 实验结果及讨论

2.6 本章小结

第3章修饰产物免疫原性的研究

3.1 修饰产物的动物免疫

3.2 动物血清的抗体滴度测定

3.3 抗体特异性的测定

3.4 抗体亲和力的测定

3.5 统计分析

3.6 实验结果与讨论

3.7本章小结

第4章 结论

参考文献

作者攻读学位期间的科研成果

致谢