DADS拮抗SRC通路对DJ-1核内高表达HL-60细胞侵袭迁移的影响

摘要

[目的]研究二烯丙基二硫（DADS）对 DJ-1核内高表达人白血病HL-60细胞侵袭迁移影响的作用机制，为白血病治疗的发展提供更完善的分子机制，为白血病患者找出更多的有效药物。
　　[方法]通过Western blot检测DADS对DJ-1核内高表达HL-60细胞DJ-1表达的影响，以及DADS对DJ-1核内高表达HL-60细胞Src通路的影响。随后，再通过Western blot检测DADS及Src抑制剂对DJ-1核内高表达HL-60细胞Src通路的影响，以及DADS与Src抑制剂联合作用下对DJ-1表达的影响。应用Transwell迁移侵袭小室实验分别观察DADS及Src抑制剂对DJ-1核内高表达HL-60细胞增殖、侵袭迁移的影响。针对实验所需，实验分三组：对照组（HL-60细胞）、空载体组及高表达组（DJ-1核内高表达HL-60细胞）。
　　[结果]Western blot结果显示，DADS处理后的DJ-1核内高表达HL-60细胞24h、48h、72h后，DJ-1蛋白表达水平表现为时间依赖性的下降（P<0.05）。经DADS处理后，对照组、空载体组、高表达细胞p-Src、p-Fak的蛋白表达水平较未处理的各组均显著下降（P<0.05），三组细胞的Src、Fak、Integrin的总蛋白表达水平没有显著变化。随后的Western blot结果显示，DADS及Src抑制剂处理后，对照组、空载体组、高表达组细胞的p-Src、p-Fak的蛋白表达水平较未处理的各组均显著下降（P<0.05），而三组细胞Src、Fak、Integrin的总蛋白表达水平亦没有显著变化。二者联合处理 DJ-1核内高表达HL-60细胞24h、48h、72h后，DJ-1蛋白水平表现为时间依赖性的下降（P<0.05）。Transwell迁移和侵袭实验结果显示，DADS、Src抑制剂单独以及联合处理对照组与高表达组细胞后，DADS与抑制剂均可以抑制细胞侵袭迁移能力（P<0.05），且经二者联合处理后的细胞侵袭迁移抑制作用更显著（P<0.05）。
　　[结论]：1. DADS可通过拮抗Src信号通路，下调DJ-1，抑制白血病细胞侵袭与迁移。2.Src抑制剂也具有抑制白血病细胞侵袭迁移的作用，且 Src抑制剂可以增强DADS抗肿瘤的效应。

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主要英文缩略语索引

第１章 绪 论

第２章 实验材料及方法

2.1材料

2.1.1细胞：

2.1.2主要试剂：

2.1.3主要仪器：

2.2 实验方法

2.2.1 细胞的培养

2.2.2 药物的处理

2.2.3 IC50值的测定

2.2.4 Western blot

2.2.5 Transwell细胞迁移实验

2.2.6 Transwell细胞侵袭实验

2.2.7 统计学处理

第３章实验结果

3.1 DADS对DJ-1核内高表达HL-60细胞DJ-1蛋白表达的影响

3.2 DADS对DJ-1核内高表达HL-60细胞Src信号通路的影响

3.3 DADS及Src抑制剂对DJ-1核内高表达HL-60细胞Src信号通路的影响

3.4 DADS及Src抑制剂对DJ-1核内高表达HL-60细胞DJ-1表达的影响

3.5 DADS及Src抑制对DJ-1核内高表达HL-60细胞侵袭迁移能力的影响

3.5.1 迁移实验

3.5.2 侵袭实验

第４章讨 论

第5章结 论

参考文献

文献综述:全反式维甲酸及三氧化二砷诱导细胞分化机制

读硕期间撰写的论文

本研究课题资助项目

致谢