胰腺癌Panc-1细胞中miR-103a-3p靶向作用Dicer1基因的研究

摘要

目的：微小 RNA(microRNA，miRNA)与肿瘤的发生发展关系密切，其主要通过与靶基因mRNA的3’UTR结合进而导致mRNA降解或抑制mRNA翻译，最终促进或抑制肿瘤的发生发展。本实验中我们通过寻找miR-103a-3p的潜在靶基因，并验证miR-103a-3p与潜在靶基因在胰腺癌细胞株Panc-1中的靶向关系。在此基础上进一步探讨miR-103a-3p调节其靶基因表达的作用方式，为下一步体内实验奠定基础，同时也为寻求胰腺癌有效的治疗靶点提供理论依据。
　　方法：1.利用靶基因预测软件并结合相关因素分析，筛选出Dicer1可能为miR-103a-3p的靶基因；2.利用双荧光素酶报告基因技术，验证miR-103a-3p与Dicer1基因的靶向关系；3.构建miR-103a-3p inhibitor转染成功的胰腺癌细胞 Panc-1并检验转染效率；4.利用实时荧光定量PCR及Western Blot技术分别检测miR-103a-3p和Dicer1的表达，从功能上验证miR-103a-3p对Dicer1基因的调控关系。
　　结果：1.通过八个数据库预测miR-103a-3p作用的靶基因，结果显示Dicer1预测值较高，在八个数据库预测中都存在靶向关系，且Dicer1在胰腺癌中研究较为成熟，因此，选定了Dicer1作为miR-103a-3p靶基因的验证对象；2.基因测序结果表明，携带Dicer1基因3’-UTR序列的GV306报告基因载体构建成功，与miR-103a-3p inhibitor共转染细胞后，荧光素酶活性较对照组明显上升（P＜0.05）；3. Panc-1胰腺癌细胞转染miR-103a-3p inhibitor后，Panc-1细胞中miR-103a-3p的表达水平明显下降（P＜0.05）；4.在Panc-1细胞中，miR-103a-3p浓度与Dicer1的mRNA水平无明显相关性，而与Dicer1蛋白表达水平呈负相关。
　　结论：1. Dicer1基因是miR-103a-3p的靶基因，其3’-UTR序列中存在miR-103a-3p的作用靶点；2.通过瞬时转染miR-103a-3p inhibitor，成功构建低表达miR-103a-3p的Panc-1细胞系；3.在胰腺癌Panc-1细胞中，miR-103a-3p在转录后水平调节Dicer1基因的表达。

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中英文缩略词表

第1章 引 言

第2章 材料与方法

2.1 实验材料

2.2 实验方法

第3章 实验结果

3.1 靶基因预测

3.2 双荧光素酶报告基因

3.3 miR-103a-3p inhibitor转染Panc-1细胞系

3.4 miR-103a-3p对靶基因Dicer1的调控

第4章 讨论

第5章 结论

参考文献

综述:微小RNA在胰腺癌侵袭转移中的作用及机制

科研成果

论文受以下基金项目资助

致谢