湖南省结核病耐药情况分析及耐药突变位点分布

摘要

目的：通过对湖南地区结核分枝杆菌阳性的菌株作抗结核药敏试验，了解湖南地区结核分枝杆菌耐药现状及变化规律，制定耐药谱；将部分菌株进行利福平与异烟肼相关耐药基因检测，并与常规药敏进行分析，比较两者的符合率；通过检测耐药基因，了解湖南地区耐药基因的突变情况，从而掌握湖南结核病流行的基线资料,为有效的预防控制结核病提供参考。
　　方法：收集2013年1月1日－2014年9月30日湖南各地区就诊于长沙市中心医院的确诊为肺结核的2331例病例采用绝对浓度法进行常规药敏，包含异烟肼（INH）、链霉素(SM)、乙胺丁醇(EMB)、利福平(RFP)、氨基水杨酸(PAS)、卡那霉素(KM)、乙硫异烟胺(ETO)、吡嗪酰胺(PZA)和左氧氟沙星(LFX)共9种药物；同时选取其中1031例样本应用基因芯片技术检测RFP和INH耐药相关的rpoB、katG和inhA基因上的位点突变，比较传统药敏与分子药敏符合程度，评价基因芯片技术在临床上的应用价值。
　　结果：
　　1.湖南结核病耐药流行情况:①2331例病例中，初治1678例，占所有菌株的71.99％，复治653例，所占比例为28.01%。总耐药率为22.52%（525/2331），其中，初治的耐药率为15.20%（255/1678），复治的耐药率为41.35%(270/653)，χ2=223.1，P＜0.05，差异有统计学意义，复治患者的耐药率高于初治患者。②耐多药率为8.11%(189/2331)，其中初治耐多药率为3.87%（65/1678）,复治耐多药率为18.99%(124/653),χ2=519.8，P＜0.05，差异有统计学意义， 复治患者的耐多药率高于初治患者。③任一抗结核药物的耐药顺位从高到低为INH、RFP、SM、EMB、LFX、PZA、PAS、ETO、KM，其中，INH耐药率最高，高达14.16%。④本研究共检出6例XDR-TB，耐药率为0.26%(6/2331)，其中有1例初治患者，其余5例均为复治患者。
　　2.芯片法与绝对浓度法比较:①与绝对浓度法比较（包含敏感株896例，耐药株135例），耐药芯片检测RFP耐药结果与其一致的菌株共1011例（包含敏感株894例，耐药株117例），符合率98.06%；②与绝对浓度法比较（包含敏感株901例，耐药株130例），基因芯片检测INH耐药结果与其一致的菌株共1005例（包含敏感株890例，耐药株115例），符合率97.48%；③与利福平耐药相关的rpoB基因的突变位点中，最常见的为531 TCG→TTG，69例，占突变菌株的51.1%（69/135）；其次为526CAC→TAC，14例，占突变菌株的10.4%（14/135）；526 CAC→GAC共11例菌株突变，占突变菌株的8.15%（11/135）。异烟肼耐药主要是由katG315位突变引起，占突变株的88.5%（115/130），仅11.5%（15/130）是由于inhA突变导致的耐药。
　　结论：
　　1.湖南地区结核病耐药以及MDR-TB的发生率均处在全国中等偏低水平，但是耐药情况依然不容乐观，需要人们高度重视。
　　2.湖南地区结核分枝杆菌对实验的9种药物均存在不同程度的耐药，任一药物耐药从高到低的耐药顺位分别为：INH、RFP、SM、EMB、LFX、PZA、PAS、ETO、KM。
　　3.基因芯片检测技术与绝对浓度法结果高度一致，可以成为湖南地区快速筛查RFP和INH耐药性的有效方法。
　　4.湖南地区结核分枝杆菌对 RFP和 INH耐药的主要突变位点为rpoB531，526以及katG315位点。

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绪论

第一部分湖南省结核分枝杆菌耐药情况分析

第1章 研究对象和方法

1.1研究对象

1.2研究内容

1.3材料

1.4方法

1.5统计方法

第2章 结果

2.1 病人基本情况

2.2总体耐药情况

2.3任一药物耐药情况

2.4单一药物耐药情况

2.5耐多药与广泛耐药

第3章 讨论

第4章 小结

第二部分基因芯片法用于检测湖南地区结核分枝杆菌耐药性研究

第1章 研究对象与方法

1.1材料

1.2 方法

1.3 统计方法

第2章 结果

2.1 芯片结果

2.2耐RFP基因芯片检测结果

2.3耐INH基因芯片检测结果

第3章 讨论

第4章 小结

全文结论

参考文献

综述:结核分枝杆菌耐利福平和异烟肼分子机制的研究进展

攻读学位期间研究成果

致谢