外源性硫化氢对博来霉素诱导的大鼠肺纤维化及肺组织IL-6、JAK2、STAT3表达的影响

摘要

目的：观察在博来霉素（bleomycin，BLM）诱导的大鼠纤维化肺组织中白介素-6（interleukin-6，IL-6）、janus激酶2（Janus Kinases2，JAK2）、信号转导子和转录激活子3（signal transducers and activators of transcription3，STAT3）的表达以及外源性硫化氢（Hydrogen sulfide， H2S）对这些因子表达的影响，探讨外源性硫化氢抗肺纤维化作用的分子生物学机制。
　　方法：采用随机数字表法将6周龄健康雄性SD大鼠60只随机分为4组，分别为空白对照组（A组）、BLM组（B组）、BLM+NaHS（H2S供体）组（C组）、BLM+醋酸泼尼松组（D组）。B、C、D组大鼠均一次性气管内滴注BLM溶液（5mg/kg）建立肺纤维化模型， A组采用同样的方法气管内滴注等体积的生理盐水。造模后第1天开始，C组予以NaHS溶液（28μmol/kg.d）腹腔注射，D组大鼠予以泼尼松混悬液（0.56mg/kg.d）灌胃，A、B两组大鼠予以等体积的生理盐水（10ml/kg.d）灌胃。灌注博来霉素或生理盐水后的第7、14、28天，每组每次随机处死5只老鼠获取肺组织，通过HE和Masson染色显微镜下观察各组大鼠肺组织的肺泡炎和肺纤维化改变；并用免疫组化和 RT-PCR法检测大鼠肺组织 IL-6、JAK2、STAT3的蛋白和mRNA表达情况。
　　结果：
　　1、肺组织的病理学检查结果符合肺纤维化典型表现，证实造模成功；肺组织病理学结果显示：A组第7、14、28天大鼠肺组织结构清晰，完整，未见明显充血、渗出等间质性炎症和纤维化改变。B组第7天可见较多炎症细胞浸润，肺泡间隔增宽，有少量成纤维细胞增生；第14天肺泡炎的程度减轻，炎性细胞减少，肺泡间隔较前增宽，成纤维细胞的增殖较前明显；第28天肺泡萎缩塌陷或消失，肺泡间隔内胶原纤维大量沉积，成纤维细胞大量增生，肺组织表面可见多发纤维结节形成，大鼠肺纤维化模型已形成；C、D两组大鼠肺组织的大体改变同B组，但肺表面的灶性出血及结节改变与B组相比，少且肺组织质地柔软。第7天、14天与纤维化组相对比炎症细胞减少，且对应时间点的肺纤维化的程度也轻于肺纤维化组。
　　2、免疫组化和RT-PCR结果显示：IL-6、JAK2、STAT3在A组对照组各个时间点均存在少量的表达；B、C、D三组大鼠在相同时间点肺组织中IL-6、JAK2、STAT3的表达高于A组，差异具有显著性（P<0.05），在第7天时达到高峰值，随时间的延长在肺组织中的表达逐渐减少，但在第28天时表达仍高于正常组（P<0.05）；在各个时间点C、D组大鼠肺组织中IL-6、JAK2、STAT3的表达低于B组，差异有统计学意义（P<0.05）；IL-6、JAK2、STAT3的表达在C组和D组之间比较差异无统计学意义（P>0.05）。
　　结论：外源性硫化氢抑制 IL-6、JAK2、STAT3的表达可能与抗肺纤维化的作用机制有关。

目录

声明

主要英文缩略词

第1章 绪论

第2章 实验材料

2.1实验动物和饲料

2.2实验的主要药物

2.3实验的主要试剂

2.4实验的主要仪器

第3章 实验方法

3.1实验药物和试剂的配置

3.2动物分组及给药的方法

3.3肺纤维化模型的建立

3.4肺组织标本的采集和处理

3.5大鼠肺组织病理形态学的观察

3.6 RT-PCR检测IL-6、JAK2、STAT3mRNA在肺组织中的表达

3.7统计学分析

第4章 实验结果

4.1大鼠一般情况的观察

4.2大鼠肺组织病理形态学改变

4.3 SP法和RT-PCR法检测蛋白和mRNA

第5章 讨论

5.1博来霉素诱导建立肺纤维化模型的评价

5.2外源性硫化氢对BLM诱导大鼠肺纤维化的影响

第6章 结论

参考文献

综述: JAK/STAT在肺纤维化中的研究进展

硕士期间发表的论文

致谢