盐霉素上调ATP2A3诱导前列腺癌PC-3细胞内质网应激的体外研究

摘要

目的：
　　探讨盐霉素诱导前列腺癌PC-3细胞内质网应激及其可能机制，为临床应用盐霉素治疗前列腺癌提供实验依据。
　　材料与方法：
　　取对数生长期前列腺癌PC-3细胞进行实验。①采用qPCR检测内质网应激中的主要基因表达：实验分浓度梯度组和时间梯度组。浓度梯度组采用盐霉素浓度依次为0、0.25、0.5、1、2、5μmol/mL，处理前列腺癌PC-3细胞24h；时间梯度组采用盐霉素浓度5μmol/mL处理前列腺癌PC-3细胞时间分别为0、4、6、8、12、24h。各组满足其实验条件后予以相应检测。②采用Westren Blot检测内质网应激中的主要蛋白表达：实验分组方式同实验①。各组满足其实验条件后予以相应检测。③采用Westren Blot检测ATP2A3过表达组和ATP2A3干扰后内质网应激中的主要蛋白表达量。④盐霉素处理ATP2A3过表达组和ATP2A3干扰的前列腺癌PC-3细胞后， Westren Blot检测内质网应激中的主要蛋白表达量。⑤qPCR结果单组采用T检验,组间对比采用方差分析；Westren Blot结果采用单因素方差分析。
　　结果：
　　①qPCR检测可见:0、0.25、0.5、1、2、5μmol/mL的盐霉素处理前列腺癌PC-3细胞24h后，内质网应激主要基因BiP、PERK、eiF2a、ATF4、IRE1a、ATF6在盐霉素作用下表达量均上调，提示列腺癌PC-3细胞内质网应激对盐霉素具有浓度依赖性；5μmol/mL的盐霉素处理前列腺癌PC-3细胞0、4、6、8、12、24h后，内质网应激主要基因BiP、PERK、eiF2a、ATF4、IRE1a、ATF6在盐霉素作用下表达量均上调，提示列腺癌PC-3细胞内质网应激对盐霉素具有时间依赖性。②Westren Blot检测可见：0、0.25、0.5、1、2、5μmol/mL的盐霉素处理前列腺癌PC-3细胞24h后，ATP2A3蛋白与内质网应激主要蛋白BiP、PERK、eiF2a、ATF4对盐霉素具有浓度依赖性，IRE1a、ATF6蛋白表达量差异不具有显著性（P>0.05）。5μmol/mL的盐霉素处理前列腺癌PC-3细胞0、4、6、8、12、24h后，ATP2A3蛋白与内质网应激主要蛋白BiP、PERK、eiF2a、ATF4对盐霉素具有时间依赖性，IRE1a、ATF6蛋白表达量差异不具有显著性（P>0.05）。④Westren Blot检测可见：ATP2A3过表达组与ATP2A3干扰后内质网应激中的主要蛋白PERK、eiF2a、ATF4表达量差异不具有显著性（P>0.05）。5μmol/mL的盐霉素处理前列腺癌PC-3细胞24h后，ATP2A3过表达组内质网应激主要蛋白PERK、eiF2a、ATF4表达量增加，差异具有显著性（P<0.05）；ATP2A3干扰内质网应激主要蛋白PERK、eiF2a、ATF4表达量差异不具有显著性（P>0.05）。
　　结论：
　　盐霉素可能通过上调ATP2A3的表达从而激活Bip-PERK通路诱导前列腺癌PC-3细胞内质网应激。

目录

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主要缩略语英文索引

第一章 前言

第二章 材料与方法

2.1.实验材料

2.2主要实验仪器

2.3实验方法

第三章 实验结果

3.1 qPCR实验验证盐霉素处理PC-3细胞内质网应激相关基因表达情况

3.2 Western Blot验证盐霉素不同浓度处理PC-3细胞诱导内质网应激及其相关蛋白表达量

3.3 Western Blot验证盐霉素不同时间点处理PC-3细胞诱导内质网应激及其相关蛋白表达量

3.4 ATP2A3过表达及其ATP2A3干扰模型建立

3.5 转染后Western Blot检测前列腺癌PC-3细胞内质网应激相关蛋白表达情况

3.6转染后Western Blot检测盐霉素5ul/ml处理PC-3细胞24h内质网应激相关蛋白表达情况

第四章 讨论

4.1 qPCR验证盐霉素诱导PC-3细胞内质网应激

4.2Westren Blot检测对不同浓度盐霉素处理前列腺癌PC-3细胞的影响

4.3Westren Blot检测不同时点盐霉素处理前列腺癌PC-3细胞的影响

第五章 结论

参考文献

综述:盐霉素在前列腺癌治疗中的进展

致谢