NCS1诱导高尔基体应激介导apelin-13促血管平滑肌细胞迁移

摘要

目的：Apelin作为APJ的内源性配体，apelin/APJ系统在心脑血管疾病中起着重要的作用。本课题组前期报道apelin-13可通过PI3K-Akt、ERK1/2、14-3-3、NOX4\ROS、Notch3途径促血管平滑肌细胞增殖，参与动脉粥样硬化的形成。文献报道细胞迁移也可参与动脉粥样硬化形成，本课题旨在探讨apelin-13对人主动脉血管平滑肌细胞迁移的作用，深入讨论NCS1诱导高尔基体应激介导apelin-13促人主动脉血管平滑肌细胞迁移新的分子机制，发现新的潜在的用于治疗高血压等血管增生性疾病及动脉粥样硬化疾病的新的作用机制及作用靶点。
　　方法：
　　1. Western Blot：检测人主动脉血管平滑肌细胞NCS1，GOLPH3表达；
　　2. Wound healing:检测人主动脉血管平滑肌细胞迁移；
　　3. Transwell迁移检测apelin-13对HA-VSMCs迁移的影响；
　　4.透射电子显微镜观察HA-VSMCs中高尔基体形态；
　　5.免疫荧光观察GOLPH3在亚细胞定位情况；
　　6. RNA干扰:设计 RNA干扰链分别干扰 HA-VSMCs中 NCS1、GOLPH3的表达；
　　7.免疫组化法分别检测apelin、APJ、NCS1及GOLPH3蛋白在双肾双夹高血压大鼠主动脉血管平滑肌组织中和人尸检冠状动脉粥样硬化的血管平滑肌组织中的表达；
　　结果：
　　1.划痕实验和transwell迁移实验显示apelin-13浓度（0-1μmol/L）依赖性促人血管平滑肌细胞迁移；
　　2. Apelin-13浓度（0-1μmol/L）和时间（0-24h）依赖性促进高尔基体应激标志物GOLPH3的表达；
　　3.APJ阻断剂F13A抑制apelin-13诱导的GOLPH3的表达；
　　4. Apelin-13使GOLPH3的亚细胞定位发生改变，从细胞核周围聚集向胞浆中扩散；
　　5.透射电子显微镜观察发现apelin-13诱导高尔基体结构碎裂；
　　6. Apelin-13浓度（0-1μmol/L）和时间（0-24h）依赖性促NCS1的表达；
　　7. APJ抑制剂F13A抑制apelin-13诱导的人血管平滑肌细胞中NCS1的表达；
　　8.RNA干扰沉默NCS1下调apelin-13诱导的人血管平滑肌细胞中高尔基体应激标志物GOLPH3的表达；
　　9. RNA干扰沉默NCS1抑制apelin-13诱导的高尔基体结构的碎裂；
　　10.RNA分别干扰沉默NCS1或者GOLPH3抑制apelin-13促人血管平滑肌细胞的迁移作用；
　　11. Apelin、APJ、NCS1及GOLPH3在尸检动脉粥样硬化冠状动脉人的血管平滑肌组织的表达呈阳性，明显高于在尸检正常人的冠状动脉血管平滑肌组织中的表达；双肾双夹高血压大鼠主动脉血管平滑肌组织中apelin、APJ及GOLPH3的表达明显增加，并且其血管壁发生明显的增生及增厚。
　　结论：NCS1诱导高尔基体应激介导apelin-13促人主动脉血管平滑肌细胞迁移。

目录

声明

主要英文缩略语索引

第1章 绪论

第2章 实验材料

2.1 实验细胞

2.2 主要试剂

2.3 主要仪器

第3章 实验方法

3.1 细胞培养

3.2 Western blot

3.3 划痕实验

3.4 Transwell迁移实验

3.5 免疫组织化学法

3.6 透射电子显微镜

3.7 免疫荧光

3.8 siRNA干扰技术

3.9 统计学方法

第4章 实验结果

4.1 Apelin-13促人血管平滑肌细胞（VSMCs）迁移的作用

4.2 Apelin-13诱导人血管平滑肌细胞（VSMCs）高尔基体应激

4.3 NCS1介导apelin-13促人血管平滑肌细胞（VSMCs）高尔基体应激

4.4 Apelin-13 通过 NCS1 诱导高尔基体应激促人血管平滑肌细胞（VSMCs）迁移

4.5 Apelin、APJ、NCS1及GOLPH3在动脉粥样硬化冠状动脉人的血管平滑肌组织及双肾双夹高血压大鼠主动脉血管平滑肌组织中的表达

第5章 讨论

第6章 结论

参考文献

文献翻译: 小分子靶向IRE1阻碍动脉粥样硬化进程

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作者攻读学位期间的科研成果

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