猪生长激素抗独特型抗体的制备及其生物特性的研究

摘要

猪生长激素(porcine growth hormone，pGH)是猪垂体前叶分泌的长为191个氨基酸的单链多肽类激素。生长激素是调节机体正常生长和发育的主要激素之一，它促进氨基酸进入细胞以及RNA的生物合成，从而加速蛋白质的合成，不仅促进骨的生长，且影响许多组织的生长；GH促进脂肪的分解以及脂肪酸氧化供能，加速脂类的代谢，显著提高猪的生长速度、饲料报酬和瘦肉率。研制开发猪生长激素类饲料添加剂具有较高的商业价值和科研价值。 猪生长激素最早从猪的垂体组织中提取，不仅费时费工，而且产量有限，无法在生产中推广应用。随着科技发展，国外最早于1983年用大肠杆菌生产出pGH后，人们开始通过生物工程方法制备猪生长激素。用生物工程方法制备猪生长激素，涉及基因调控、表达及蛋白质分离纯化等多项技术。目前生物工程生产的猪生长激素由于蛋白质生物活性低、产量低、成本高、并且需连续、大剂量多次肌肉注射或皮下包埋等不足之处，限制了其应用。激素免疫学的兴起，使有目的的改变内分泌平衡并产生有意义的生理学效应成为可能，许多学者对此已进行了大量的实验研究，已经取得很大成功。 本实验采用纯化的猪生长激素单克隆抗体作为抗原，免疫山羊，获得羊抗猪生长激素抗独特型抗体，并对其免疫特性进行鉴定。还以异硫氰酸荧光素(FITC)标记所获得猪生长激素抗独特型抗体作为探针，使之与猪肝细胞上生长激素受体结合，应用共聚焦激光扫描显微镜，观察免疫荧光标记的猪生长激素抗独特型抗体在猪肝细胞的结合情况，对生长激素抗独特型抗体在结构上模拟生长激素的结合特性进行定位研究，第三，在小白鼠上验证其的促生长活性。研究结果发现，所获得猪生长激素抗独特型抗体具有与生长激素相似的免疫学特性。标记的生长激素抗独特型抗体能够与猪肝细胞膜生长激素受体特异性的结合。试验证明所获得的猪生长激素抗独特型抗体作为猪生长激素的模拟物在结构上存在着与猪生长激素相似性。且在小白鼠的促生长活性试验中证明猪生长激素抗独特型抗体作为猪生长激素的模拟物对小白鼠具有促生长活性。 本实验的研究结果为应用抗独特型抗体促进猪的生长提供了实验依据，也为进一步探讨免疫调控激素促生长作用的机理，研制开发安全有效的新型生长激素替代物奠定理论和技术基础。

目录

文摘

英文文摘

声明

前言

实验一猪生长激素抗独特型抗体(Ab2)的制备和鉴定

1材料与方法

1.1材料

1.2方法

2结果与分析

2.1单克隆抗腹水及培养上清效价的测定

2.2猪生长激素单克隆抗体（AB1）的纯化结果

2.3羊抗猪生长激素单克隆（1A3）的抗体血清效价测定

2.4羊抗猪生长激素单抗（1A3）血清纯化结果

2.6竞争抑制实验结果

3

4小结

实验二猪生长激素抗独特型抗体(Ab2)结构特性的研究

1材料与方法

1.1材料

1.2实验方法

2.结果

2.1肝细胞的分离和培养结果

2.2激光共聚焦扫描显微镜观察肝细胞荧光染色结果

3.讨论

4.小结

实验三猪生长激素抗独特型抗体对小白鼠的促生长活性研究

1材料与方法

1.1动物与药品

1.2实验分组及处理

1.3统计分析

2结果

2.1各种处理对小鼠体重等项指标的影响

2.2各种处理后的小鼠各周体重的变化情况

3讨论

4小结

结论

参考文献

附录

致谢

作者简历