DADS诱导人白血病HL-60细胞自噬性细胞死亡

摘要

目的：检测DADS诱导人白血病HL-60细胞的自噬性死亡作用，为优化DADS抗白血病作用，及DADS临床应用提供实验理论依据。 方法：用CCK-8法检测DADS对HL-60细胞增殖的影响；用Western blot法检测DADS处理后HL-60细胞自噬标志性蛋白LC3B-Ⅱ表达的变化；用自噬抑制剂3-MA联合DADS处理HL-60细胞后检测细胞增殖及诱导自噬作用，Western blot法检测细胞内自噬标志性蛋白LC3B-Ⅱ和p62，凋亡标志性蛋白Clevead PARP的表达。 结果：CCK-8法检测HL-60细胞被不同DADS浓度0（溶媒）、25、50、75、100和125uM处理72h后，细胞增殖率为（99.44±4.32）%、（56.39±6.53）%、（47.53±3.21）%、（36.61±2.86）%、（32.22±5.92）%、（30.41±6.35）%，DADS对HL-60细胞的增殖抑制作用明显。Western blot检测0（溶媒）、25、50、75和100uM浓度的DADS处理HL-60细胞72h后，自噬标志性蛋白LC3B-II的表达情况随着DADS处理浓度增高而成正相关，说明在此DADS处理浓度区间内，HL-60细胞自噬水平与DADS浓度正相关。自噬抑制剂联合DADS处理HL-60细胞，Western blot检测结果显示随着3-MA处理浓度的增大，自噬标志性蛋白LC3B-II表达逐渐减弱，说明3-MA能有效减弱DADS诱导的自噬作用。CCK-8检测溶媒组（DMSO）、0uM组、25uM组、100uM组和空白对照组共5组3-MA处理后HL-60细胞增殖的影响，结果表明25、50uM处理条件下HL-60细胞增殖率为（98.57±2.35）%、（97.87±2.71）%，与溶媒组相比无统计学意义，而100uM处理条件下HL-60细胞增殖率为（90.15±3.55）%与溶媒组相比差异具有统计学意义，得知50uM是本实验3-MA最佳处理浓度。用50uM DADS和50uM3-MA设立DADS-/3-MA-（溶媒组）、DADS+/3-MA-、DADS+/3-MA+和DADS-/3-MA+四组实验组，以及空白对照组处理HL-60细胞。用CCK-8法检测发现四组对比空白对照组的HL-60细胞增殖率分别为：（98.58±1.94）%、（53.49±3.63）%、（68.61±6.15）%、（98.86±5.99）%，结果说明3-MA能有效的减弱DADS对HL-60细胞的增殖抑制作用。用Western blot检测3-MA联合DADS处理HL-60细胞后凋亡标志性蛋白Clevead PARP和自噬标志性蛋白LC3B-Ⅱ、p62的表达情况，与溶媒组（DADS-/3-MA-）相比，单DADS处理组（DADS+/3-MA-）的LC3B-Ⅱ和Cleaved PARP的表达明显增强，而p62蛋白表达明显减弱，说明DADS能同时诱导HL-60细胞自噬和凋亡的发生。DADS与3-MA联合处理组（DADS+/3-MA+）与单DADS处理组（DADS+/3-MA-）相比，LC3B-Ⅱ蛋白表达减弱，p62蛋白表达增强，但Cleaved PARP蛋白表达变化不显著，由此可以得知自噬抑制剂3-MA能够减弱DADS诱导的自噬水平，但对DADS诱导细胞的凋亡无影响。 结论：1.自噬抑制剂3-MA抑制自噬可减弱DADS对HL-60细胞增殖抑制作用；2.DADS可诱导HL-60细胞自噬相关性死亡，且可能不依赖caspase凋亡途径。

目录

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主要英文缩略语索引

第１章 前 言

第２章 实验材料及方法

2.1材料

2.1.1细胞株

2.1.2药品

2.1.3主要试剂

2.1.4主要仪器

2.1.5主要试剂配制与保存

2.2 实验方法

2.2.1 细胞培养技术

2.2.2 细胞计数

2.2.3 CCK-8实验

2.2.4Western blot

2.2.5 统计学处理

第３章 实验结果

3.1 DADS对人白血病HL-60细胞的增殖抑制作用。

3.2 DADS诱导人白血病HL-60细胞自噬的检测

3.3 3-MA减弱DADS处理HL-60细胞诱导产生的自噬

3.4 3-MA有效减弱DADS对HL-60细胞的增殖抑制作用

3.5 3-MA对DADS诱导HL-60细胞自噬与凋亡的影响

第４章 讨 论

第５章 结 论

参考文献

文献综述自噬性细胞死亡相关研究进展

攻读学位期间的科研成果

本研究课题资助项目

致谢