On-resin多肽连接方法研究及新型嘧啶类化合物的合成

摘要

目的：多肽连接方法的改进和新型嘧啶类药物合成与活性表征 方法：1、天冬氨酸的侧链与Rink-酰胺树脂相接。然后在N-端延伸，分别得到FRGN、AVPIN、LLLLLN、LYRAN四条模型肽，通过FRGN、AVPIN、LLLLLN、LYRAN与CRKSGA、CRGDRGD、CAAFGGRDAG、Aux-aa（aa=Gly、Asp、Ala、Lys）经on-resin多肽连接法连接。分别用HPLC、LC-MS对连接产物进行液相分析和质谱确证。 2、以2.4-氯-6-三氟甲基嘧啶为母核，经Suzuki-miyaura偶联、取代、缩合反应得到一系列嘧啶类衍生物。采用细胞转染、电生理、Transwell检测肿瘤细胞迁移、SRB检测细胞存活等实验对PC-3M细胞进行活性测验。分析合成的嘧啶类衍生物对PC-3M细胞的抑制作用。 结果：1、通过FRGN、AVPIN、LLLLLN和CRKSGA、CRGDRGD、CAAFGGRDAG、Aux-aa（aa=Gly、Asp、Ala、Lys）连接产物的HPLC分析表明，“on-resin”的连接方法显著减少了环化的副产物、树脂上的NCL实现了几乎100％的转化率，在AVPIN、LLLLLN两个难溶性肽的连接也取得了优异成果。LYRAN与Aux-aa（aa=Gly、Asp、Ala、Lys）分别用液相和on-resin连接，结果显示，on-resin连接方法明显可以简化纯化过程。 2、氢谱分析、质谱分析、碳谱分析确证了合成的22个化合物。体外活性实验数据表明合成的22个嘧啶类衍生物对PC-3M细胞有明显的抑制作用。其中化合物1的抑制作用中效果显著，并且低毒高效，能够抑制肿瘤细胞的迁移。 结论：1、已经开发了一种新的on-resin多肽连接方法，可以通过天然化学连接提供N-末端延伸和C-末端连接的灵活性或辅助基团肽连接。 2、合成了一系列具有良好活性的新型嘧啶类衍生物。

目录

声明

第一部分 On-resin多肽连接方法研究

1背景

1.1 多肽固相合成

1.2天然化学多肽偶联法

1.3 小结

2. 多肽连接

2.1 on-resin多肽连接

2.2 多肽合成仪合成多肽

2.3高效液相色谱分析与制备分析程序

2.4液相色谱质谱检测

2.5 实验耗材

3. 实验过程与结果讨论

3.1 Asn连接位点在Rink-酰胺树脂上的环化改进及硫酯的制备

3.2 FRGN-SAr（3）和Aux-R(R=Gly，Ala，Asp，Lys)及模型肽的连接

3.3 Asn连接位点在Rink-酰胺树脂连接延伸序列AVPI和LLLLL的NCL连接

3.4 Asn连接位点在Rink-酰胺树脂与辅助基团氨基酸分别在树脂上和溶液中进行NCL连接

3.5 Aux-Xaa (xaa=G，A，D，K)与模型肽的制备

附本部分多肽产物质谱图

第二部分新型嘧啶类化合物的合成

1 背景介绍

1.1 嘧啶类药物应用

1.2 嘧啶类药物的修饰

1.3小结

2 实验过程与结果

2.1 实验仪器与耗材

2.2 化学合成

3 合成化合物的体外抗肿瘤活性初步测定

3.1 抑制癌细胞增殖实验

3.2 化合物对TRPV2离子通道的调节作用

3.3 抑制癌细胞迁移实验

3.4 体外抗肿瘤活性实验结果与讨论

总结

参考文献

英文缩写词索引

作者攻读学位期间的科研成果

致谢

文献综述:Suzuki-Miyaura偶联反应在多肽的合成与修饰中的研究