重症哮喘小鼠肺和脾组织中MBD2及SOCS3的表达

摘要

目的：观察重症哮喘小鼠肺组织和脾细胞中MBD2、SOCS3及STAT3的表达，初步探讨MBD2及SOCS3在重症哮喘小鼠发病机制中作用。 方法：1.30只小鼠随机分为3组，每组10只，用100μgHDM+100μgOVA+15μgLPS构建重症哮喘小鼠模型，25μgOVA构建普通哮喘小鼠模型，生理盐水构建对照组小鼠模型；观察各组小鼠行为学变化、检测小鼠肺功能、BALF细胞计数、肺组织病理学，用ELISA法检测各组小鼠血清及肺泡灌洗液上清中IL-17浓度；2.采用Western-blot方法检测三组小鼠肺和脾细胞中MBD2、SOCS3、STAT3蛋白表达水平；3.采用PCR技术检测三组小鼠肺和脾细胞中MBD2、SOCS3、STAT3基因表达情况。 结果：1.与对照组、普通哮喘组比较，重症哮喘组小鼠出现嗜睡，当在乙酰甲胆碱刺激下重症哮喘组小鼠气道阻力明显升高，BALF中细胞总数及中性粒细胞数量最高，肺组织炎症反应最明显，小鼠血清及肺泡灌洗液上清中IL-17表达最高；2.脾细胞Western-blot结果显示，与对照组相比较，普通哮喘组及重症哮喘组脾细胞中的MBD2及STAT3蛋白表达均有增加，其中重症哮喘组表达最强（P＜0.05）。与对照组相比较，重症哮喘组小鼠脾细胞中SOCS3蛋白表达无明显差异，与普通哮喘组相比较，重症哮喘组小鼠脾细胞中SOCS3蛋白表达降低。3.肺组织Western-blot结果示，与对照组相比较，普通哮喘组及重症哮喘组小鼠肺组织中的MBD2、STAT3蛋白表达均有增加，其中重症哮喘组最高（P＜0.05）。重症哮喘组小鼠肺组织中SOCS3表达低于对照组和普通哮喘组（P＜0.05）。4.脾细胞PCR显示，普通哮喘组及重症哮喘组MBD2基因的相对表达高于对照组，而重症哮喘组增加最明显（P＜0.05）。与对照组相比较，普通哮喘组及重症哮喘组STAT3及SOCS3表达无明显差异（P＞0.05）。5.肺组织PCR显示，重症哮喘组MBD2高于对照组和普通哮喘组，而SOCS3相对表达量低于对照组和普通哮喘组（P＜0.05）。在三组小鼠肺组织中STAT3基因相对表达无明显差异（P＞0.05）。 结论：1.重症哮喘小鼠肺组织及脾细胞中MBD2表达增加，而SOCS3低表达。 2.MBD2与SOCS3参与重症哮喘的发病可能与调控Th17细胞的分化有关。

目录

声明

主要缩略语英文索引

第1章 前言

1.1重症哮喘

1.2 表观遗传学介质MBD2

1.3 细胞因子信号转导抑制分子3及信号传导与转录激活因子3

第2章 材料与方法

2.1 实验材料

2.1.1 实验动物

2.1.2 主要实验试剂

2.1.3主要仪器设备

2.2 实验方法

2.2.1 重症哮喘小鼠模型的构建

2.2.2肺组织中Western blot检测

2.2.3脾脏细胞中Western blot检测

2.2.4 肺组织RT-PCR检测

2.3 统计学分析

第3章 实验结果

3.1 重症哮喘小鼠模型建立

3.1.1 小鼠行为学观察

3.1.2 小鼠肺功能检测结果

3.1.3 小鼠BALF中细胞总数及分类计数

3.1.4 小鼠肺组织病理学结果

3.1.5 小鼠肺组织炎症反应半定量评分

3.1.6三组小鼠肺泡灌洗液和血清中IL-17的表达

3.2 Western-blot检测MBD2、SOCS3、STAT3在三组小鼠脾细胞中的表达

3.3 Western-blot检测MBD2、SOCS3、STAT3在三组小鼠肺组织中的表达

3.4 PCR检测MBD2、SOCS3、STAT3基因在三组小鼠脾细胞中的表达

3.5 RT-PCR检测MBD2、SOCS3、STAT3基因在三组小鼠肺组织中的表达

第4章 讨论

4.1重症哮喘小鼠模型的建立

4.2 MBD2与重症哮喘

4.3 SOCS3与重症哮喘

4.4 展望

第5章 结 论

参考文献

综述:MBD2和SOCS3调控Th17细胞与重症哮喘发病机制

作者攻读学位期间的科研成果

致谢