鞘内注射Reelin重组蛋白对大鼠慢性神经病理性疼痛的影响

摘要

目的：探讨鞘内注射Reelin重组蛋白对大鼠慢性坐骨神经压迫性损伤（chronic constriction injury，CCI）模型中大鼠疼痛行为学及脊髓水平Reelin信号通路下游蛋白Dab1磷酸化、星形胶质细胞的活化及TNF-α表达的相关性研究。 方法：鞘内置管成功的SD雄性大鼠54只，无运动功能障碍，体重250-400g，年龄8-10周，随机数字表法分成三组，Sham组（假手术+鞘内注射PBS）（n=18)，CCI组（坐骨神经结扎+鞘内注射PBS）(n=18)，RELN组（坐骨神经结扎+鞘内注射Reelin重组蛋白）(n=18)。RELN组与CCI组采用4-0羊肠线结扎右侧坐骨神经建立慢性疼痛模型，Sham组予以暴露坐骨神经但不结扎。RELN组于CCI术后第10天鞘内注射Reelin重组蛋白5μl(0.01μg/μl)，其余组给予5μlPBS溶液。记录CCI术前1天，术后1、4、7、10、11、12、13、14、15、17、21天大鼠右侧后足底痛行为学指标，包括热缩足潜伏期（paw withdrawal thermal latency,PWTL）和机械缩足阈值（paw withdrawal mechanical threshold,PWMT）。分别于给药后1小时，给药后3天处死大鼠，取右侧腰膨大部位脊髓背角，采用免疫组化、Western blot方法检测Dab1磷酸化、GFAP、TNF-α的表达情况。 结果：（1）术前各组大鼠的基础PWMT和PWTL无明显区别。Sham组大鼠前后PWTL和PWTL无明显差异；CCI组大鼠从术后第1d开始各时间点PWMT和PWTL均低于Sham组（P＜0.05）,且持续至术后第21d。RELN组鞘内注射Reelin重组蛋白后1h、1、2、3、4、5d大鼠的PWMT和PWTL明显增加（P＜0.05）。（2）免疫组化的结果与Western blot的结果显示，与Sham组相比，CCI组手术侧大鼠脊髓背角Dab1磷酸化的表达明显减少（P＜0.05），术后第10d、13d脊髓背角GFAP、TNF-α的表达上调。与CCI组相比，RELN组鞘内注射Reelin重组蛋白后1小时、给药后3d大鼠右侧脊髓背角p-Dab1表达明显增加（P＜0.05）,大鼠脊髓背角GFAP、TNF-α的表达明显减少（P＜0.05）。 结论：鞘内注射Reelin重组蛋白可以缓解神经病理性疼痛，其机制可能与其抑制脊髓背角星形胶质细胞的活化及TNF-α的表达有关。

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主要英文缩略语索引

第一章 绪 论

第二章 材料与方法

2.1.1 试剂

2.1.2 仪器

2.2 方法

2.2.1实验动物

2.2.2鞘内置管模型制备

2.2.3制备CCI模型

2.2.4实验分组

2.2.5疼痛行为学检测

2.2.6 鞘内给药

2.2.7免疫组化

2.2.8蛋白免疫印迹杂交法（Western Blot）

2.2.9 统计学处理

第三章 结果

3.1.1 大鼠行为学观察

3.1.2 CCI组大鼠行为学变化

3.1.3 鞘内注射Reelin重组蛋白对大鼠行为学的影响

3.2 CCI术后大鼠脊髓水平Reelin下游蛋白p-Dab1表达减少，鞘内注射Reelin重组蛋白后增加p-Dab1的表达

3.3 CCI术后大鼠脊髓水平GFAP表达增加，鞘内注射Reelin重组蛋白减少GFAP的表达

3.4 CCI术后大鼠脊髓水平TNF-α表达增加，鞘内注射Reelin重组蛋白减少TNF-α的表达

第四章 讨论

第五章 结论

参考文献

综述:神经炎症与神经病理性疼痛的研究进展

致谢